细胞培养—如何揭开细胞冻存与复苏的秘密！

在美国科幻大片中，经常会有因为某些特殊原因被冻存起来的超人，醒来已经过了百年，容颜依旧、身体机能依旧，依然可以拯救人类。这其中就涉及到一个细胞冻存的概念，细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。其实自己也可以动手来做关于细胞冻存的实验，下面本生科技就具体来分析下吧!

细胞冻存操作步骤：

1.用移液器吸走原培养基，加入适量PBS洗1-2遍;

2.加入适量胰酶，置于培养箱中消化;

3.待消化到位后加入适量血清或*培养基终止消化，800-1000rpm离心3-5min;

4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL，转移到冻存管中;

5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存。

细胞冻存注意事项：

1.冻存液常规配比为培养基：血清：DMSO=7:2:1，如果细胞比较珍贵，可以调整为血清：DMSO=9:1;

2.如果没有程序降温盒，可以将冻存细胞依次放于4度1h，-20度2h，-80过夜，再转至液氮罐内;

3.冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年，液氮中通常不建议超过2年;

4.细胞如果是次养，建议至少冻存两个批次以上，以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种;

细胞复苏操作步骤：

1.准备工作：开启恒温水浴锅，将温度调节在37℃，取一离心管，加入5ml细胞培养基;

2.取出冻存管，立即放入水浴锅中快速摇晃，让冻存液迅速融化;

3.打开冻存管，将冻存液小心转移到预先加入有培养基的离心管中，800rpm离心5分钟;

4.小心弃掉上清，加入约5ml培养基重悬细胞;

5.将所得细胞悬液转移入培养瓶中，盖上瓶塞，置培养箱培养，观察细胞的状态;