PCR/qPCR耗材选择的几个主要因素!

　　1.塑料耗材组成：

　　材料

　　PCR/qPCR耗材通常由聚丙烯制成，因为它是惰性的并且能够承受热循环过程中温度的快速变化。 聚丙烯的惰性性质使其对于反应物质的吸收降低至最小，确保获取最佳的PCR结果。为了进一步保障在纯度和生物兼容性方面的批次间一致性，应当在生产过程中使用全新未循环使用的医学级或分子生物学级高品质聚丙烯原料。请注意，某些PCR / qPCR板边框用更强的聚碳酸酯制成，以与高通量机器人应用兼容。

　　颜色

　　PCR管和板通常可提供多种不同的颜色形式，以便于对于样品的视觉区分和鉴别，特别是在高通量实验中。尽管塑料的颜色对DNA扩增没有影响，但在设置实时PCR或qPCR的反应时，与透明耗材相比，我们更推荐使用白色塑料或磨砂耗材，以实现灵敏和准确的荧光检测(图43)。

　　白色耗材通过阻止荧光折射出管来提高qPCR数据的灵敏度和一致性。折射被最小化时，更多的信号被反射回检测器，从而增加信噪比。此外，白色管壁可阻止荧光信号传递至PCR仪模块，避免被吸收或不一致地反射荧光信号，从而使重复实验中的差异降至。由于每个品牌仪器的设计不同，请遵循厂家建议以获得最佳性能。比如，对于Bio-Rad和Roche品牌的定量仪器，推荐使用白色耗材用于qPCR。而对于Applied Biosystems荧光定量PCR仪，推荐使用磨砂孔耗材。

　　PCR/qPCR塑料耗材要点：

　　PCR/qPCR塑料耗材可提供多种规格和形式。了解他们相应的特点和相关术语将会帮助您在使用这些塑料耗材时获得最佳的PCR和qPCR结果。

　　一般属性

　　反应规模或加样体积

　　PCR/qPCR塑料耗材的加样体积决定了可成功进行的PCR/qPCR反应的规模(体积)。过量的加样将会导致热传导的效率下降，溢出以及交叉污染。另一方面，加样不足则会导致样品因蒸发而损耗。加热模块也决定了可使用的塑料耗材尺寸以及它们对于完整而有效热传导的最佳适配性。PCR/qPCR耗材的最常见体积规格为：

　　管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔板：0.02 mL

　　裙边：

　　PCR / qPCR板的“裙"是板周围的板。裙边可为反应体系构建时的移液过程提供较好的稳定性，以及在进行自动机械处理时提供更好的机械强度。PCR / qPCR平板可分为无裙边，半裙边和全裙边。

　　无裙边板缺少周围的面板。这种形式的反应板可与绝大多数PCR仪和实时PCR仪的模块适配，但不适用于自动化应用。

　　半裙边板在板的边缘周围具有短的边缘,在移液过程中提供足够的支撑并且为机器人处理提供机械强度。

　　全裙边的 PCR / qPCR板具有覆盖板高度的边缘面板.这种板形式适用于具有突出模块的PCR仪(可有利于自动化操作)，可安全稳固适配。