ELISA检测试剂盒如何避免假阳性现象及实验关键点

　　1、加样

　　对于间接进口ELISA检测试剂盒标本一般都要进行稀释，如果加样不准就会造成误差，尤其当稀释倍数大时，很小的绝对误差，会导致较大的相对误差，使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性)。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。目前，大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免以上误差。

　　2、洗涤

　　在进口ELISA检测试剂盒中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果常与不正确的洗涤有关，ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。

　　3、 温育

　　每种试剂都有其*合适的反应模式，其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。温育一般用湿盒或水浴，反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。

　　4、酶标仪判读

　　作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正;其次酶标仪波长设置要正确，使用双波长，一个检测波长，一个参比波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外，在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读说明书

　　由于酶联免疫吸附技术目前在技术上缺乏标准化，尽管目前国际上以及我国有了部分标准血清或参比血清(血清盘)。但由于受方法学及技术条件的限制，在酶联吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，但我们可以通过以上措施把非特异性显色降至限底，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。

　　ELISA实验的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，其中，结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。进行检测时，样品中的受检物质(抗原或抗体)与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度。

　　那么ELISA试剂盒需把握的关键有哪些?

　　1.在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。一切试剂瓶盖须盖紧以避免蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致呈现错误的结果。

　　2.小心汲取试剂并严格遵守给定的孵育时刻和温度。请注意在汲取标本/规范品，酶结合物或底物时，di一个孔与一个孔加样之间的时刻距离假如太大，将会导致不同的 “预孵育"时刻，然后明显地影响到测量值的准确性及重复性。

　　3.试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。

　　4.浓洗涤液会有盐分出，稀释时可在水浴中加温助溶。

　　5.刚敞开的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对试验结果造成任何影响。

　　6.一切的样品都应管理好，依照规则的程序处理样品和检测设备。

　　ELISA试剂盒 本生是实验室本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。