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如何判断酶标条检测结果准确性
酶标仪检测通常基于化学发光和荧光的原理,测定结果以光学密度值或强度值呈现。要判断酶标条检测结果的准确性,首先需关注滤光片的质量。滤光片的波长精度和峰值直接影响酶标仪的灵敏度和准确度,因此,定期用高精度紫外可见分光光度计检测滤光片的波长精度是必要的。
其次,可通过检测标准品来评估。例如,使用已知浓度的重铬酸钾和对硝基苯酚溶液,分别检测其吸光度,并与预期值比对,以判断仪器的灵敏度和准确度。
此外,还应考虑检测器的质量、通道差、孔间差、零点飘移以及仪器的精密度和稳定性等因素。这些都直接影响酶标条检测结果的准确性。
以下是判断酶标条检测结果准确性的系统方法:
一、实验内质控标准
变异系数(CV)评估
同一孔板内重复样本的CV值应<10%,若超过则提示移液误差或污染可能。计算方式为:CV=(标准差/平均值)×100%。
空白对照扣除
需用空白孔OD值校正样本数据,消除非特异性结合干扰。校正后样本OD值应显著高于空白对照(通常≥2.1倍)。
标准曲线验证
标准品R²值需≥0.99,线性范围覆盖待测样本浓度
各标准点回收率应在80%-120%之间
二、结果判读方法
阳性判定值(Cut-off)法
临界值=阴性对照OD均值+3×标准差,样本OD高于此值判为阳性。
信噪比(S/N)评估
阳性样本OD值需≥阴性对照OD均值的2.5倍。
三、设备与操作验证
酶标仪性能检测
灵敏度:6μg/ml重铬酸钾溶液在450nm处OD值应≥0.01A
准确度:1mmol/L对硝基苯酚稀释液在405nm处OD值应为0.395-0.408A
酶标板均一性测试
包被IgG后,各孔OD值与均值偏差应<10%。
四、样本可靠性指标
稀释线性度
样本稀释5倍后,测量值变化应在理论值的70%-130%范围内。
基质效应排除
加标回收率测试中,回收率80%-120%表明样本基质无显著干扰。
建议每批次实验同时运行阴/阳性对照及标准曲线,并定期校准酶标仪。
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