天津本生：ELISA实验中常见的问题有哪些?

　　以下是ELISA实验中常见问题及解决方案的综合整理：

　　一、显色异常问题

　　显色浅/灵敏度低‌

　　试剂未充分平衡(室温平衡≥20分钟)

　　样本类型不适(如组织裂解液需优化稀释条件)

　　底物孵育时间不足(建议显色15分钟内终止)

　　背景高/假阳性‌

　　洗涤不净(洗液注满孔，静置15秒后拍干)

　　底物污染(避光保存，若变黄需更换)

　　非特异性结合(使用合适封闭液，避免抗体过量)

　　二、操作相关问题

　　加样误差‌

　　加样量不一致(校准移液器，控制单次加样时间≤5分钟)

　　交叉污染(使用一次性吸头，避免溅洒)

　　孵育问题‌

　　温度波动(推荐37℃恒温，避免开盖蒸发)

　　时间过长(严格按说明书控制，避免非特异性结合)

　　洗涤问题‌

　　洗板不净(洗液需1:20稀释，避免结晶未溶解)

　　拍干不充分(使用无尘滤纸，勿重复拍板)

　　三、重复性差

　　原因‌：操作人员或条件不一致(如加样时间、洗涤力度差异)

　　解决‌：

　　同一人员操作，使用振荡器混匀样本

　　标准化孵育时间和温度

　　四、其他典型问题

　　白板现象(无显色)‌

　　漏加酶标抗体或显色剂

　　试剂失活(检查保存条件是否为2-8℃)

　　标准曲线异常‌

　　复溶不当(冻干标准品需冰上溶解，避免反复冻融)

　　稀释误差(使用硅化EP管减少蛋白吸附)

　　关键预防措施

　　样本处理‌：血清/血浆离心后分装，避免反复冻融

　　试剂保存‌：显色剂现配现用，洗涤液室温使用

　　设备校准‌：定期校验移液器和酶标仪波长

　　如需具体问题排查，可结合实验步骤对照上述要点。以上资料仅供参考。

　　天津本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。