以下是ELISA试剂盒实验前准备阶段的常见问题及解决方案的整理：

　　一、试剂盒选择与保存问题

　　试剂盒类型混淆‌

　　未区分直接/间接/夹心ELISA试剂盒，导致实验设计错误。

　　解决方案：根据检测目标(抗原或抗体)选择匹配的试剂盒类型。

　　试剂保存不当‌

　　冻干标准品未在-20℃保存或反复冻融，导致活性丧失。

　　显色剂未避光保存(如底物溶液变黄提示污染)。

　　二、样本处理问题

　　样本类型错误‌

　　血清未离心直接使用(需3000rpm离心10分钟取上清)。

　　组织样本未充分匀浆(建议冰浴中机械匀浆10秒/次)。

　　样本保存失效‌

　　反复冻融导致蛋白降解(建议分装保存，-80℃可存6个月)。

　　细菌污染(采集时需无菌操作，避免内源性酶干扰)。

　　三、实验器材问题

　　器材未校准‌

　　移液器误差>5%(需定期校准，加样时间控制在5分钟内)。

　　酶标板未预处理(非即用型试剂盒需自行包被，选用ELISA板材)。

　　耗材污染‌

　　使用普通EP管吸附蛋白(推荐硅化EP管减少吸附)。

　　洗板机残留(手工洗板需垂直拍板，避免交叉污染)。

　　四、环境与操作问题

　　温度控制不足‌

　　试剂未室温平衡(需提前20分钟平衡，避免动力学差异)。

　　孵育温度波动(需37℃恒温，水浴需封闭防蒸发)。

　　操作不规范‌

　　加样顺序混乱(需按说明书顺序加样，保证显色时间一致)。

　　未穿戴防护装备(需穿实验服、戴手套口罩防污染)。

　　关键预防措施

　　标准品复溶‌：冻干品需冰上溶解，静置10分钟轻摇混匀。

　　洗涤液配制‌：20×浓缩液需1:20稀释，避免结晶未溶。

　　阴性对照设置‌：避免高浓度样本污染空白孔。

　　通过规范操作和细节控制可显著提升实验成功率。

　　如需具体问题排查，可结合实验步骤对照上述要点。注：以上资料仅供参考。

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