酶联免疫吸附测定(ELISA)原理

　　酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种基于抗原-抗体特异性结合与酶催化显色的免疫检测技术，其核心原理可分为以下关键步骤：

　　一、固相载体包被

　　抗原/抗体固定化‌

　　将已知抗原或抗体吸附于固相载体(通常为聚苯乙烯微孔板)表面，并保持其免疫活性

　　封闭处理‌

　　使用无关蛋白(如BSA)封闭未结合位点，减少非特异性结合

　　二、特异性结合反应

　　样本孵育‌

　　加入待测样本，目标分子(抗原或抗体)与固相载体上的对应结合物形成免疫复合物

　　洗涤分离‌

　　通过多次洗涤去除未结合的游离成分，确保反应特异性

　　三、酶标记与信号放大

　　酶标二抗/抗原‌

　　加入酶标记的抗体或抗原(如HRP标记)，与目标分子特异性结合

　　催化显色‌

　　加入底物(如TMB)后，酶催化底物产生有色产物，颜色深浅与目标物浓度成正比

　　四、检测与定量

　　光学测量‌

　　使用酶标仪测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算目标物浓度

　　灵敏度优势‌

　　酶的高效催化作用可放大信号，检测限可达皮摩尔级别

　　常见方法类型

　　类型 特点 适用场景

　　直接法‌ 酶标一抗直接结合抗原，步骤简单但灵敏度较低 单一抗原检测

　　间接法‌ 使用酶标二抗放大信号，提高灵敏度 抗体检测(如血清学)

　　夹心法‌ 需两种特异性抗体分别捕获和检测抗原，特异性最高 复杂样本中的微量抗原

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或供应商。

　　注：实际应用中需根据检测目标选择方法类型，并优化包被浓度、封闭条件等参数。以上资料仅供参考具体请咨询技术老师或供应商。

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