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酶联免疫吸附测定(ELISA)原理
酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种基于抗原-抗体特异性结合与酶催化显色的免疫检测技术,其核心原理可分为以下关键步骤:
一、固相载体包被
抗原/抗体固定化
将已知抗原或抗体吸附于固相载体(通常为聚苯乙烯微孔板)表面,并保持其免疫活性
封闭处理
使用无关蛋白(如BSA)封闭未结合位点,减少非特异性结合
二、特异性结合反应
样本孵育
加入待测样本,目标分子(抗原或抗体)与固相载体上的对应结合物形成免疫复合物
洗涤分离
通过多次洗涤去除未结合的游离成分,确保反应特异性
三、酶标记与信号放大
酶标二抗/抗原
加入酶标记的抗体或抗原(如HRP标记),与目标分子特异性结合
催化显色
加入底物(如TMB)后,酶催化底物产生有色产物,颜色深浅与目标物浓度成正比
四、检测与定量
光学测量
使用酶标仪测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算目标物浓度
灵敏度优势
酶的高效催化作用可放大信号,检测限可达皮摩尔级别
常见方法类型
类型 特点 适用场景
直接法 酶标一抗直接结合抗原,步骤简单但灵敏度较低 单一抗原检测
间接法 使用酶标二抗放大信号,提高灵敏度 抗体检测(如血清学)
夹心法 需两种特异性抗体分别捕获和检测抗原,特异性最高 复杂样本中的微量抗原
注:以上资料仅供参考,具体请咨询技术老师或供应商。
注:实际应用中需根据检测目标选择方法类型,并优化包被浓度、封闭条件等参数。以上资料仅供参考具体请咨询技术老师或供应商。
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