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琼脂糖电泳常见问题及解决方案
更新时间:2025-06-10浏览:76次

  琼脂糖电泳常见问题及解决方案

  以下是琼脂糖电泳常见问题及解决方案的总结:

  一、‌条带异常问题‌

  条带模糊/拖尾‌

  原因‌:DNA降解、缓冲液陈旧或上样过量

  解决‌:

  使用新鲜缓冲液(TAE/TBE),避免反复使用;

  减少上样量(每孔≤10μL),避免超载;

  检查核酸酶污染,确保样品纯度。

  条带扭曲或"笑脸型"‌

  原因‌:电场不均、梳子拔出不当或胶体凝固不均


  解决‌:

  预电泳5分钟(低电压)平衡电场;

  垂直缓慢拔梳子,避免孔变形。

  Marker条带不清晰‌

  原因‌:胶浓度不合适或染料分布不均

  解决‌:

  调整胶浓度(0.8%-2%按片段大小选择);

  改用泡染法(如GelRed后染色)。

  二、‌电泳过程问题‌

  DNA迁移异常‌

  电压过高‌:>10V/cm易致条带扩散,建议5-8V/cm;

  缓冲液错误‌:避免用自来水或高浓度母液,需1×TAE/TBE。

  凝胶漂浮或缓冲液不流动‌

  原因‌:冷却泵故障或密封不良

  解决‌:检查设备密封性,调整蠕动泵速度。

  三、‌其他关键问题‌

  无条带显示‌

  原因‌:电极接触不良、DNA未染色或样品降解

  解决‌:检查电极连接,确认染料活性。

  背景荧光高‌

  原因‌:胶体杂质或紫外曝光过久

  解决‌:过滤琼脂糖溶液,缩短紫外观察时间。

  拖尾现象‌

  原因‌:DNA结合蛋白或盐分污染

  解决‌:酚/氯仿纯化样品,乙醇沉淀去盐。

  四、‌预防性建议‌

  制胶‌:微波加热琼脂糖至透明,冷却至60℃再加染料;

  维护‌:每次使用后蒸馏水冲洗电极,避免盐结晶腐蚀;

  保存‌:Marker需-20℃避光保存,避免反复冻融。

  通过规范操作与针对性调整,可显著提升电泳结果质量。

  BS-300   基础性电泳仪电源

  BS-600C  通用型电泳仪电源

  BS-mini01  垂直电泳槽(双板)

  BS-mini04  垂直电泳槽(四板)

  BS-ZY03   转印电泳槽(WB双板和铂乐通用)

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  BS-sub02  琼脂糖电泳槽

  注:以上资料仅供参考,具体请咨询技术老师。

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