标签：Elisa 抗体 标准品 缓冲液 本生试剂盒 裂解液 蛋白酶

　　在ELISA检测中，固体样本(如组织、粪便、植物、食品等)需要经过适当处理，以释放目标分子(如蛋白质、抗原或抗体)并消除干扰物质。以下是 固体样本处理的常用方法及步骤：

　　一、固体样本处理通用流程

　　1. 样本收集与保存

　　快速处理：避免样本降解(如组织样本离体后尽快冷冻或液氮保存)。

　　储存条件：-80℃长期保存，避免反复冻融。

　　2. 样本均质化

　　通过物理或化学方法破碎细胞/组织，释放目标分子：

　　机械破碎：

　　液氮研磨(适用于组织、植物)

　　匀浆器/超声破碎(适用于软组织、细菌)

　　珠磨法(适用于坚硬样本如种子、粪便)

　　酶解法：

　　使用蛋白酶K、溶菌酶等(适用于微生物或含细胞壁的样本)。

　　3. 裂解缓冲液选择

　　根据目标分子性质选择裂解液：

　　RIPA缓冲液(通用型，含去垢剂如Triton X-100、SDS)

　　PBS/TBS缓冲液(温和裂解，适用于可溶性蛋白)

　　特殊缓冲液：

　　含EDTA(抑制金属蛋白酶)

　　含蛋白酶抑制剂(防止蛋白降解)

　　4. 离心去杂质

　　低温离心(4℃，10,000–15,000 ×g，10–15分钟)去除细胞碎片、不溶物。

　　取上清用于ELISA检测(避免吸取沉淀)。

　　5. 蛋白浓度测定与标准化

　　用BCA/Bradford法测定总蛋白浓度，调整至统一浓度(如1–2 mg/mL)，避免检测偏差。

　　6. 干扰物去除(可选)

　　脂质干扰：有机溶剂(如丙酮)沉淀或脂质吸附剂处理。

　　多糖/酚类干扰(植物样本)：PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)吸附。

　　内源性酶干扰：加热灭活或添加抑制剂(如HRP样本避免辣根过氧化物酶干扰)。

　　二、常见固体样本处理示例

　　1. 动物组织(如肝脏、肿瘤)

　　步骤：

　　液氮速冻，研磨成粉末。

　　加入RIPA裂解液(含蛋白酶抑制剂)，冰上裂解30分钟。

　　离心取上清，测定蛋白浓度后稀释至相同浓度。

　　2. 植物叶片

　　步骤：

　　液氮研磨后，加入PVP(去除多酚)和Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)。

　　离心后取上清，必要时透析去除色素。

　　3. 粪便样本

　　步骤：

　　悬浮于PBS(如1:10 w/v)，涡旋混匀。

　　离心去除大颗粒，上清过滤(0.22 μm)或进一步纯化(如PEG沉淀病毒)。

　　4. 食品(如肉类、谷物)

　　步骤：

　　均质化后，用PBS或专用提取缓冲液(如食品过敏原检测试剂盒配套缓冲液)提取。

　　离心后取上清，必要时脱脂(正己烷洗涤)。

　　三、注意事项

　　避免过度裂解：可能导致目标蛋白降解或非特异性结合。

　　对照设置：

　　阴性对照：裂解缓冲液空白。

　　阳性对照：已知浓度标准品。

　　样本稀释：若信号过强，需用裂解缓冲液稀释后重测。

　　批次一致性：同一实验使用相同处理条件的样本。

　　四、优化方向

　　预实验：测试不同裂解液和离心条件，选择最佳回收率。

　　试剂盒兼容性：某些ELISA试剂盒提供专用样本处理缓冲液(如粪便DNA/RNA保存液)。

　　通过规范化的固体样本处理，可显著提高ELISA检测的准确性和重复性!

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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