ELISA实验：ELISA样本收集处理方法

　　以下是ELISA实验中不同样本类型的收集与处理方法，结合实验规范与关键注意事项进行系统整理：

　　一、血清样本处理

　　采集要求‌

　　使用无热源、无内毒素的试管采集血液，室温静置2小时或4℃过夜使血清析出，倾斜放置可增加析出效率‌。

　　4℃条件下1000×g离心20分钟，避免溶血(红细胞裂解会释放过氧化物酶干扰HRP标记检测)‌。

　　保存方法‌

　　分装后-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。溶血或高血脂样本需弃用‌。

　　二、血浆样本处理

　　抗凝剂选择‌

　　采用EDTA或肝素钠抗凝管采集血液，30分钟内4℃ 1000×g离心15分钟取上清‌。

　　需核对试剂说明书，部分检测对抗凝剂类型有特殊要求(如避免肝素干扰某些抗体结合)‌。

　　存储注意事项‌

　　分装冷冻保存，避免室温长时间放置导致凝血因子降解‌。

　　三、细胞培养上清处理

　　预处理步骤‌

　　收集上清后需两次离心：1000×g离心20分钟去除细胞碎片，第二次13000×g离心10分钟确保杂质清除‌。

　　酸化中和处理：100μL样本加20μL 1N HCl孵育10分钟，再用20μL 1.2N NaOH/0.5M HEPES中和‌。

　　质量控制‌

　　建议BCA法测定总蛋白浓度，确保样本一致性‌。

　　四、组织样本处理

　　匀浆制备‌

　　冰上操作：按10mg组织加入100-200μL裂解液，匀浆后4℃静置20分钟‌。

　　离心条件：13000×g离心10分钟取上清，重复离心可提高纯度‌。

　　缓冲液选择‌

　　推荐0.05mol/L Tris或磷酸盐缓冲液(pH 7.4)维持等渗环境‌。

　　五、通用注意事项

　　防污染措施‌

　　使用一次性耗材，加样时更换枪头，避免交叉污染‌。

　　操作分区：加样、孵育、洗涤区域分离，高浓度样本最后处理‌。

　　稳定性控制‌

　　冻存样本需缓慢解冻(2-8℃ 30分钟以上)，避免直接室温解冻导致蛋白变性‌。

　　通过规范化的样本处理流程，可显著提升ELISA检测的准确性和重复性‌。

　　注：以上资料仅供参考，具体产品请咨询技术老师或是品牌供应商。

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