Elisa实验：ELISA试剂盒标准操作流程

　　一、实验前准备

　　试剂平衡‌

　　从2-8℃取出试剂盒，所有组分(包括酶标板、标准品、检测抗体等)需室温平衡30分钟，避免冷凝水干扰‌。

　　浓缩洗涤液若有结晶，需37℃水浴至溶解‌。

　　耗材检查‌

　　核对试剂盒组分与说明书是否一致，确认酶标板无破损、污染‌。

　　未使用的板条需密封后冷藏保存‌。

　　二、标准品与样本处理

　　标准品稀释‌

　　冻干标准品需离心后加指定体积稀释液溶解，涡旋混匀‌。

　　梯度稀释建议使用1.5mL EP管，按2倍比例逐级稀释(如S7→S0)，每步需换枪头并充分混匀‌。

　　样本预处理‌

　　细胞上清需3000rpm离心10分钟去除杂质‌。

　　高浓度样本需按说明书稀释(如5倍)‌。

　　三、加样与孵育

　　孔位布局‌

　　设置标准品孔(梯度浓度)、样本孔(建议复孔)、空白孔(仅加稀释液)‌。

　　加样体积通常为50-100μL，枪头需悬空垂直加液，避免触碰孔壁‌。

　　孵育条件‌

　　加入检测抗体后，37℃避光孵育1-2小时，震荡(300rpm)可提高结合效率‌。

　　四、洗涤与显色

　　洗板规范‌

　　手工洗板：每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩干，重复3-5次，最后拍干‌。

　　自动洗板机建议设置30秒浸泡程序‌。

　　显色控制‌

　　底物(如TMB)需避光操作，37℃孵育15-30分钟，显色至孔内液体变蓝‌。

　　终止液加入后5分钟内需完成读数(颜色变黄)‌。

　　五、数据读取与分析

　　酶标仪设置‌

　　双波长检测(主波长450nm，参考波长630nm)，避免孔间干扰‌。

　　标准曲线拟合‌

　　使用CurveExpert或Excel拟合4参数曲线，计算样本浓度‌。

　　六、注意事项

　　关键控制点‌：

　　避免酶标板长时间暴露于室温，孵育时需密封‌。

　　不同批次试剂不可混用，HRP工作液需现配现用‌。

　　异常处理‌：

　　显色过浅：检查孵育时间或底物活性‌。

　　背景过高：洗涤不充分或抗体浓度过高‌。

　　(注：具体操作需以试剂盒说明书为准，不同品牌可能存在细节差异‌。)

　　BS-1502人内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒

　　BS-2489小鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒

　　BS-3364大鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验数据，具体请咨询品牌供应商或技术老师;

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