ELISA显色信号弱?BUNSEN本生解析常见原因及解决方案

　　针对ELISA显色信号弱的问题，结合BUNSEN本生的技术分析，以下是系统性原因排查及解决方案：

　　一、试剂相关因素‌

　　试剂未充分平衡‌

　　从4℃取出试剂后需室温平衡20分钟(避免温差导致反应效率下降)

　　酶标试剂(如HRP)反复冻融易失活，建议分装保存

　　底物问题‌

　　TMB底物污染或过期(更换新鲜避光保存的底物)

　　显色剂A/B加入顺序错误(需先加A液后加B液)

　　二、操作流程问题‌

　　孵育条件不当‌

　　37℃孵育时需使用微孔板振荡器(静置孵育抗原抗体结合不充分)

　　培养箱温度波动需<0.5℃，避免频繁开门

　　移液误差‌

　　移液器未校准(建议每月校验，使用原厂吸头确保密封性)

　　吸头内壁挂液(更换低吸附吸头，垂直吸液避免倾斜)

　　洗涤不净‌

　　残留HRP酶导致背景干扰(洗涤液注满孔后浸泡1分钟，重复5次)

　　手工洗板需拍干液体，避免交叉污染

　　三、样本与系统问题‌

　　样本浓度过低‌

　　目标蛋白低于检测限(尝试浓缩样本或换用高敏ELISA试剂盒)

　　溶血/脂血样本需离心去杂质

　　仪器设置‌

　　酶标仪未预热(需提10分钟启动)

　　双波长检测未启用(建议主波长450nm，参比波长630nm)

　　四、关键控制点‌

　　显色时间‌：TMB显色10-15分钟(最高浓度孔呈淡蓝色时终止)

　　对照设置‌：阴阳性对照缺失会导致结果误判

　　环境控制‌：避免强光直射底物(建议避光操作)

　　通过规范操作流程和针对性优化，可显著提升显色信号强度。

　　注：以上资料仅供参考，如需进一步了解产品详情，可参考品牌供应商或技术老师。

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