在使用BUNSEN生化试剂盒进行实验时，可能会遇到一些影响结果的问题。本指南旨在帮助您快速定位问题根源并找到解决方案，确保实验的准确性和可靠性。

　　一、 标准曲线/结果不佳类问题

　　问题：标准曲线线性差(R² < 0.99)

　　可能原因及解决方案：

　　标准品配制错误：检查标准品复溶体积是否正确，稀释是否精确，是否使用了指定的稀释液。建议使用校准过的移液器并严格按说明书步骤操作。

　　移液操作不精确：确保移液器精度可靠，吸头与移液器匹配且气密性良好。吸取不同浓度标准品时务必更换吸头，避免交叉污染。

　　孵育时间或温度不一致：确保酶标板在孵育时被严密盖好，防止蒸发造成边缘效应，并使用稳定的恒温孵育箱。

　　试剂未充分平衡至室温：所有试剂必须在实验前平衡至室温(18-25℃)，否则反应速率不一致，导致OD值偏差。

　　问题：吸光度值普遍偏低，灵敏度不足

　　可能原因及解决方案：

　　孵育时间不足：确保每一步反应都在说明书规定的时间内完成，尤其是显色步骤。

　　试剂过期或储存不当：检查试剂盒有效期及储存条件(如2-8℃避光)。切勿使用过期试剂。某些组分(如标准品、酶制品)开盖前需离心，防止粉末损失。

　　洗涤过于剧烈或洗涤次数过多：导致结合的酶标记物被洗脱。请遵循说明书推荐的洗涤次数和浸泡时间。

　　样本中待测物浓度过低：确认样本是否需要进行浓缩处理，或选用更高灵敏度的试剂盒。

　　问题：吸光度值普遍偏高，背景深

　　可能原因及解决方案：

　　洗涤不净：确保每孔都加满洗涤液，每次洗涤后均在吸水纸上拍干，防止液体残留。检查洗板机通道是否堵塞。

　　非特异性结合：样本中可能含有干扰物质。确保样本已按说明书要求进行适当稀释或预处理(如离心去除沉淀物)。

　　显色时间过长：TMB底物显色时间需严格控制，一旦标准曲线最高点出现明显蓝色即可终止。过度显色会导致背景过高。

　　酶结合物或检测抗体浓度过高：确认是否按说明书比例稀释，严禁自行改变试剂用量。

　　二、 操作与重复性类问题

　　问题：复孔间差异大(重复性差)

　　可能原因及解决方案：

　　移液误差：这是最常见的原因。检查移液器精度，确保吸头内壁液体被排出，操作手法保持一致。

　　样本未混匀：加样前，所有液体(样本、标准品、试剂)应通过轻微涡旋或反复吹打的方式充分混匀。

　　微孔板底部有残留液体或气泡：洗板后务必拍干，加液后检查孔内是否有气泡，可用干净枪头戳破。

　　部分孔反应液蒸发：孵育时务必使用高质量的封板膜密封板孔，确保密封性。

　　问题：整板颜色不均匀(边缘效应)

　　可能原因及解决方案：

　　孵育温度不均：确保酶标板在孵育时离开冰箱冷凝水，并水平放置在孵育箱内部，不要靠近箱门或边缘。

　　板孔间温差：孵育时不要叠放多块板子，以免阻碍热传导。

　　操作时间差异过大：从加样到孵育的间隔时间应尽量短，避免板孔内反应时间不一致。

　　三、 样本相关类问题

　　问题：计算结果异常(过高或过低)

　　可能原因及解决方案：

　　样本类型不符：确认您使用的样本类型(血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等)是否在试剂盒说明书的检测范围内。不同样本需使用不同的稀释液或预处理方法。

　　样本稀释倍数错误：计算结果时，务必记得乘以样本的总稀释倍数。

　　钩状效应(High Dose Hook Effect)：对于超高浓度的样本，可能导致结果假性偏低。应对样本进行多个梯度的稀释后再测，观察结果是否随稀释倍数成比例变化。

　　样本中含有干扰物质：如高脂血症血清可能引起浊度干扰，溶血样本中的血红蛋白、类风湿因子等都可能干扰检测。必要时对样本进行纯化。

　　排障流程图：快速定位问题

　　遇到问题 →

　　回顾实验记录：确认每一步操作是否严格按说明书进行。

　　检查仪器与试剂：移液器是否校准?试剂是否在有效期内并正确保存?是否平衡至室温?

　　分析标准曲线：

　　如果标准曲线良好 → 问题很可能出在样本本身(稀释、类型、干扰物)。

　　如果标准曲线也出现问题 → 问题很可能出在通用操作或试剂上(洗板、移液、孵育、试剂配制)。

　　对照本指南，缩小可能原因范围，并进行验证性实验。

　　若以上方法仍无法解决问题，请联系BUNSEN本生技术支持：

　　请提供试剂盒名称、货号、批号。

　　详细描述问题现象(可附上标准曲线图和原始数据)。

　　简述您的实验操作流程和样本信息。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际数据，如需其他请咨询技术老师或品牌供应商。

　　试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。