ELISA实验‌常见问题的综合解答

　　以下是关于本生‌ELISA实验‌常见问题的综合解答，结合多个高可信度来源整理：

　　一、样本处理与适用性‌

　　非标准样本类型‌：

　　若样本类型未在试剂盒说明书中标注，建议先进行预实验验证适配性，或直接联系厂家获取技术文献支持‌。

　　溶血影响‌：

　　轻微溶血可通过‌增加洗板次数‌(如5次以上)降低背景值;严重溶血需重新取样‌。

　　冻融影响‌：

　　反复冻融会导致蛋白降解，建议分装保存(如每管100μL)，避免多次冻融‌。

　　二、样本类型选择‌

　　样本类型‌ ‌适用场景‌ ‌注意事项‌

　　血清‌ 免疫检测、生化分析 缺乏凝血因子，避免纤维蛋白干扰‌

　　血浆‌ 凝血因子检测、蛋白定量 需添加抗凝剂(如EDTA、肝素)‌

　　三、实验操作关键点‌

　　包被与封闭‌：

　　抗体/抗原需用包被缓冲液(pH 9.0–9.6)稀释，37℃孵育2小时或4℃过夜‌。

　　封闭步骤不可省略‌，推荐使用牛血清白蛋白(BSA)或脱脂奶粉‌。

　　洗涤与显色‌：

　　洗涤需(3–5次)，避免残留物干扰‌。

　　显色阶段需避光，TMB底物反应时间控制在10–30分钟‌。

　　常见问题排查‌：

　　假阳性‌：可能由试剂污染或洗板不充分引起‌。

　　白板/显色淡‌：检查抗体活性、孵育时间或底物失效‌。

　　四、标准曲线与结果计算‌

　　标准品需覆盖预期样本浓度范围，相关系数(R²)应≥0.99‌。

　　终止液加入后15分钟内完成读数，避免信号衰减‌。

　　如需进一步了解具体操作细节，可观看以下视频教程：

　　以上内容综合了样本处理、实验操作及异常结果解析，确保实验准确性。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体产品资料请咨询技术老师或品牌供应商。

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