酶免反应显色淡、灵敏度偏低的原因及解决方案

　　一、主要原因分析

　　标本问题‌

　　目标蛋白浓度过低‌：标本中待测物质浓度低于检测下限，导致抗原-抗体结合不足‌。

　　干扰物质存在‌：如高浓度脂质、血红蛋白、类风湿因子或防腐剂(如叠氮钠)抑制反应‌。

　　试剂与操作问题‌

　　抗体效价不足‌：一抗/二抗保存不当(反复冻融、过期)或稀释比例不匹配‌。

　　孵育条件不当‌：温度或时间未达标(如37℃孵育不足30分钟)‌。

　　洗涤不净：残留未结合抗体或干扰物，或洗液配制错误(如浓缩洗液未按比例稀释)‌。

　　仪器与参数问题‌

　　酶标仪滤光片设置错误‌：波长选择不当(如TMB底物应选450nm)‌。

　　显色时间不足‌：TMB底物孵育时间过短(建议15分钟以上)‌。

　　二、针对性解决方案

　　优化标本处理‌

　　低浓度标本可通过超滤离心浓缩‌。

　　添加蛋白酶抑制剂或稀释样本以减少基质干扰‌。

　　验证试剂与操作‌

　　检查抗体效价，重新滴定工作浓度(如抗体套装，效价≥1:5000)‌。

　　严格控温控时(37℃振荡孵育)，避免酶标板干燥‌。

　　规范仪器使用‌

　　校准酶标仪波长(如TMB底物450nm)‌。

　　延长显色时间(TMB孵育15分钟)并避光操作‌。

　　三、扩展阅读

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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