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荧光定量PCR 96孔板封膜操作指南
荧光定量PCR实验中,96孔板的封膜质量直接影响荧光信号的检测准确性。以下是本生对PCR板的关键步骤与注意事项的详解:
1. 封膜前的准备
选择封板膜:
荧光定量PCR需使用高透光性封板膜(如透明自粘膜或光学热封膜),确保荧光信号无衰减。
若需热封,推荐温度设置为100-110℃,时间3秒(避免过度加热导致变形)。
清洁与防护:
戴手套操作,避免指纹污染膜面或孔板边缘。
2. 封膜操作步骤
贴膜:
从自封袋中取出单张封板膜,保持底衬面朝上,沿切线撕下底衬。
将粘性面一端对齐板子边缘,缓慢贴合并拉平,避免褶皱或偏移。
压膜:
手动压膜:用边缘光滑的卡片(如银行卡)水平、垂直各压两次,确保孔间及边缘密封。
仪器压膜:使用热封仪(100-110℃)或冷封仪(恒定压力)快速密封,避免气泡或漏液。
检查密封性:
观察膜与板间是否紧密贴合,无液体残留或褶皱。
离心(500×g,1分钟)去除气泡,提升密封效果。
3. 常见问题与解决方案
封膜不严:
原因:压力不足、温度不当或膜质量差。
解决:重新压膜或更换高粘性膜。
荧光信号异常:
原因:膜透光性差或封膜后未离心。
解决:使用光学级膜并严格离心。
4. 扩展工具推荐
热封仪:适用于快速密封,适配多种膜类型(如铝箔膜、光学膜)。
离心机:专用微孔板离心机可有效去除气泡。
注意事项:
封膜后静置10分钟,增强粘合力。
避免反复开盖,防止水蒸气影响荧光检测。
注:仅供科研使用,以上资料供参考,如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。
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