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荧光定量PCR 96孔板封膜操作指南
更新时间:2025-09-22浏览:134次

  荧光定量PCR 96孔板封膜操作指南

  荧光定量PCR实验中,96孔板的封膜质量直接影响荧光信号的检测准确性。以下是本生对PCR板的关键步骤与注意事项的详解:

  1. 封膜前的准备‌

  选择封板膜‌:

  荧光定量PCR需使用‌高透光性封板膜‌(如透明自粘膜或光学热封膜),确保荧光信号无衰减‌。

  若需热封,推荐温度设置为100-110℃,时间3秒(避免过度加热导致变形)‌。

  清洁与防护‌:

  戴手套操作,避免指纹污染膜面或孔板边缘‌。


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  2. 封膜操作步骤‌

  贴膜‌:

  从自封袋中取出单张封板膜,保持底衬面朝上,沿切线撕下底衬‌。

  将粘性面一端对齐板子边缘,缓慢贴合并拉平,避免褶皱或偏移‌。

  压膜‌:

  手动压膜‌:用边缘光滑的卡片(如银行卡)水平、垂直各压两次,确保孔间及边缘密封‌。

  仪器压膜‌:使用热封仪(100-110℃)或冷封仪(恒定压力)快速密封,避免气泡或漏液‌。

  检查密封性‌:

  观察膜与板间是否紧密贴合,无液体残留或褶皱‌。

  离心(500×g,1分钟)去除气泡,提升密封效果‌。

  3. 常见问题与解决方案‌

  封膜不严‌:

  原因:压力不足、温度不当或膜质量差。

  解决:重新压膜或更换高粘性膜‌。

  荧光信号异常‌:

  原因:膜透光性差或封膜后未离心。

  解决:使用光学级膜并严格离心‌。

  4. 扩展工具推荐‌

  热封仪‌:适用于快速密封,适配多种膜类型(如铝箔膜、光学膜)‌。

  离心机‌:专用微孔板离心机可有效去除气泡‌。

  注意事项‌:

  封膜后静置10分钟,增强粘合力‌。

  避免反复开盖,防止水蒸气影响荧光检测‌。


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  注:仅供科研使用,以上资料供参考,如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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