ELISA试剂盒常见问题解析

　　1. 标准曲线线性不佳‌

　　可能原因‌：

　　标准品溶解不充分或稀释错误(建议使用新鲜配置的母液)。

　　孵育时间/温度不稳定(需严格控制在37℃±1℃)。

　　洗板不jing(建议使用洗板机，确保每孔注满洗涤液)。

　　解决方案‌：

　　标准品分装后-20℃保存，避免反复冻融。

　　使用前充分震荡混匀，梯度稀释时更换枪头。

　　2. 显色异常(颜色过浅或过深)‌

　　可能原因‌：

　　底物溶液失效(TMB避光保存，开封后1个月内用完)。

　　终止液添加时间不一致(建议显色后5分钟内终止)。

　　样本浓度过高(需预实验确定稀释倍数)。

　　解决方案‌：

　　检查底物是否出现蓝色沉淀(变质标志)。

　　使用酶标仪读取OD值，避免肉眼判断误差。

　　3. 重复性差(板内/板间变异大)‌

　　可能原因‌：

　　加样量不准(建议使用校准后的移液器，避免气泡)。

　　孔间污染(加样时枪头勿触碰孔壁)。

　　孵育环境不均(使用恒温摇床或水浴)。

　　解决方案‌：

　　设置复孔(至少3孔/样本)，CV值应<15%。

　　4. 高背景值‌

　　可能原因‌：

　　封闭不充分(建议使用5%脱脂奶粉或BSA封闭)。

　　一抗/二抗浓度过高(需优化抗体稀释比例)。

　　洗涤液残留(洗板后拍干，避免交叉污染)。

　　解决方案‌：

　　增加封闭时间(37℃ 1小时或4℃过夜)。

　　5. 样本OD值超出标准曲线范围‌

　　可能原因‌：

　　样本基质干扰(如高脂、溶血样本需预处理)。

　　样本稀释倍数不足(建议预实验确定线性范围)。

　　解决方案‌：

　　使用样本稀释液(含1% BSA或0.1%吐温-20)。

　　6. 酶标仪读数异常‌

　　可能原因‌：

　　滤光片选择错误(TMB检测需450nm，OD校正570nm)。

　　孔底气泡或污染(读数前轻震板)。

　　解决方案‌：

　　定期校准酶标仪，使用空白孔调零。

　　操作注意事项‌

　　试剂平衡‌：所有试剂使用前需室温平衡30分钟。

　　时间控制‌：显色反应时间严格按说明书(通常10-15分钟)。

　　数据记录‌：及时记录OD值，避免终止液挥发后读数。

　　若问题持续，建议联系供应商提供技术复核(如抗体效期验证或样本检测)。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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