Elisa实验：如何判断样本是否需要稀释?

　　在ELISA实验中，判断样本是否需要稀释是确保检测结果准确可靠的关键步骤。以下是核心判断原则和操作流程：

　　核心判断原则

　　目标分子浓度预判‌

　　高浓度样本‌(如血清IgG、疫苗抗体、纯化重组蛋白)：通常需要高倍稀释(如1:100~1:1000)，以避免“钩状效应"(过量抗原导致信号值反常降低)‌。

　　低丰度样本‌(如细胞因子、神经营养因子)：建议稀释倍数≤1:10或直接使用原液检测‌。

　　试剂盒性能匹配‌

　　稀释后样本的OD值应落在标准曲线最高值OD值的半量程内(例如标准品最高OD=2.4时，目标OD≈1.2)，此时计算误差最小‌。

　　标准曲线范围需覆盖样本预期浓度，否则需调整稀释比例‌。

　　实验设计需求‌

　　横向比较实验需统一所有样本的稀释倍数，消除基质差异‌。

　　时间梯度实验可根据预期浓度变化预设差异稀释方案(如0h 1:10，24h 1:100)‌。

　　操作流程

　　预实验与梯度稀释‌

　　对未知浓度样本进行初步稀释(如1:10、1:100、1:1000)，检测OD值‌。

　　选择使OD值接近标准曲线中高浓度点(如OD≈1.2)的稀释倍数‌。

　　验证钩状效应‌

　　若高稀释倍数样本OD值高于低稀释倍数，提示存在钩状效应，需进一步稀释‌。

　　重复性与精确度评估‌

　　复孔检测CV%应<20%，若差异大需排查加样误差或污染‌。

　　常见问题处理

　　假阳性‌：类风湿因子干扰样本可加热灭活(100℃ 1分钟)‌。

　　信号异常‌：溶血样本需弃用，EDTA浓度需<5 mM‌。

　　通过以上原则和流程，可精准判断样本稀释需求，确保检测结果落在标准曲线线性范围内‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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