Elisa实验—ELISA板包被原理

　　ELISA板包被是将抗原或抗体固定到固相载体(如聚苯乙烯微孔板)表面的关键步骤，其原理主要依赖物理吸附和化学偶联两种方式：

　　物理吸附(被动包被)

　　通过疏水作用、静电作用、氢键和范德华力等非共价力实现。聚苯乙烯表面疏水性较强，蛋白质在碱性缓冲液(如pH 9.6的碳酸盐缓冲液)中易吸附‌。适用于大多数蛋白质，但小分子(如短肽、半抗原)吸附能力较弱‌。

　　化学偶联(主动包被)

　　使用交联剂(如EDC/NHS)将蛋白质的氨基或羧基与微孔板表面的活性基团共价结合‌。适用于小分子抗原、多糖、脂类等不易吸附的分子‌。

　　包被步骤

　　稀释‌：按说明书将抗原/抗体稀释至适当浓度。

　　涂布‌：加入包被液混合后涂布于酶标板。

　　洗涤‌：去除未吸附的分子，确保特异性结合‌。

　　包被质量直接影响ELISA的准确性和灵敏度，需优化条件(如蛋白浓度、缓冲液pH、孵育时间)‌。

　　优化ELISA板包被条件需系统调整以下参数：

　　一、蛋白浓度优化

　　通过方阵滴定法确定浓度：将包被原稀释为0.1-10μg/mL梯度，选择阳性OD值接近0.8且阴性OD值<0.1的低浓度。通常1-10μg/mL可满足多数蛋白需求，过高浓度可能导致非特异性吸附。

　　二、缓冲液选择

　　pH范围‌：聚苯乙烯载体pH 9.0-9.6(碳酸盐缓冲液)，不耐碱蛋白可选用pH 7.2磷酸盐缓冲液‌

　　增强剂‌：添加30mM MgCl₂或100mM CaCl₂可提升抗体吸附效率

　　三、孵育条件

　　温度‌：4℃孵育18-24小时(稳定性好)或37℃孵育2-4小时(快速)

　　时间‌：需通过实验验证，通常2-24小时不等，不耐热蛋白建议低温长时孵育

　　四、封闭优化

　　包后需用1%-5% BSA或5%-20%动物血清封闭1-2小时，BSA存在交叉反应时可改用0.8%明胶‌。封闭不会导致背景升高。Elisa试剂盒

　　五、验证与保存

　　验证‌：包后需用强/弱阳性/阴性血清验证，确保信号差异显著

　　保存‌：封闭后板可冻存于-30℃(≤6个月)或4℃短期保存

　　注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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