如何正确使用40ul全裙边384孔PCR板

    40μL全裙边384孔PCR板‌的正确使用需严格遵循选型、加样、密封、上机与后处理全流程规范，以确保实验结果的准确性与可重复性。

    一、使用前准备

    耗材检查‌：确认板体无裂纹、变形或污染，选择无DNase/RNase/PCR抑制剂的无菌板，开封后尽快使用。

    环境控制‌：在超净台内操作，紫外消毒30分钟；全程佩戴无粉手套和口罩，避免指纹或气溶胶污染。

    试剂准备‌：MasterMix冰上解冻、轻柔混匀并短暂离心（1000×g,1min），建议多配10%以防移液损耗。

    布板设计‌：绘制384孔布板图，标注样本、引物/探针、内参、阴性/阳性对照及技术重复（≥3次）；边缘孔优先设置对照以抵消边缘效应。

    工具校准‌：多通道移液器（8/16通道）校准至2–40μL量程，使用适配384孔的低吸附吸头。

    二、加样操作（稳、准、轻、无气泡）

    方向定位‌：双切角朝向左上方（A1孔侧），确保与仪器模块和移液头方向一致。

    加样顺序‌：

    先加MasterMix：吸头距孔底1–2mm，缓慢推出（2–3s），每通道更换吸头；

    后加模板/引物：轻柔吹吸2–3次混匀，禁止剧烈震荡；同一样本组连续加样以减少交叉污染。

    体积控制‌：单孔推荐体积2–25μL，最大不超过30μL，防止热封时溢出。

    除气泡‌：加样后立即短离心（2000–3000×g,2–5min），使用384孔适配器排尽气泡。

    三、密封处理（防蒸发+保荧光）

    封膜选择‌：使用光学透明粘性封板膜（qPCR专用，高透光、低荧光）。

    贴膜操作‌：

    膜从一端对齐板边，缓慢平整贴合，避免褶皱、气泡或漏封；

    用压板器或卡水平+垂直各压2次，重点压实四角与边缘。

    强化密封‌：

    可选热封仪（105–110℃,2–3s）；

    或冷封后离心（500×g,1min）验证密封性。

    禁忌‌：禁用普通封口膜或保鲜膜，因其透光差、易挥发且干扰荧光信号。

    四、上机与扩增设置

    上机操作‌：将板平稳放入384孔加热模块，双切角与仪器定位槽对齐，确保贴合；关闭热盖，压力适中以防压碎。

    参数设置示例（qPCR）‌：

    预变性：95℃,2min（1cycle）；

    扩增循环：95℃,5s；60℃,15–30s（荧光采集）；40–45cycles；

    熔解曲线（可选）：60–95℃梯度升温采集；

    启用ROX参比染料校正孔间信号差异。

    运行注意‌：避免中途开盖；运行结束后待模块降温至≤40℃再取板。

    五、实验后处理

    短期保存‌：4℃避光，≤24小时；

    长期保存‌：-20℃（避免反复冻融）；

    废弃处理‌：高压灭菌（121℃,20min）后按生物垃圾处理；不可重复使用。

    六、常见问题与规避

    注：以上供参考！

    本生产品涵盖有荧光定量PCR耗材（八联管，单管，96孔板，384孔板，封板膜，辅助器等），ELISA试剂盒，移液器吸嘴，离心管，冻存管，培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，培养基，抗体，血清，色谱耗材，针头过滤器及实验室常用耗材。品种类超过万种，广泛应用于科研院校、中心实验室、分子生物学等科研域。