小鼠白介素35(IL-35)ELISA试剂盒操作步骤

    小鼠IL-35ELISA试剂盒的通用标准操作步骤（基于主流商品化试剂盒整理，适配多数品牌）如下，实际操作请结合对应试剂盒说明书调整：

    一、实验前准备

    试剂盒从2-8℃冷藏环境取出，室温平衡至少20分钟，让所有试剂温度恢复至室温；实验所需蒸馏水/去离子水、酶标仪提前备好。

    稀释浓缩洗涤液：按说明书比例稀释（20倍浓缩液按1:19加蒸馏水，30倍浓缩液按1:29加蒸馏水），混匀备用。

    标准品复溶：冻干标准品加入对应体积的标准品稀释液，盖好后室温静置10分钟，反复颠倒搓动助溶，再按说明书进行倍比稀释，制备梯度浓度标准品。

    二、加样与孵育

    取出酶标包被板，设置‌空白孔、标准品孔、待测样本孔‌，空白孔不加样品和酶标试剂，其余步骤操作相同。

    标准品孔：每孔加入对应浓度的标准品50μL。

    待测样本孔：先加入样品稀释液40μL，再加入待测样本10μL（最终稀释度为5倍），加样时将样品加于孔底，避免触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    用封板膜封板，置于37℃恒温箱/水浴锅温育60分钟。

    三、洗涤

    揭掉封板膜，弃去孔内液体并甩干。

    每孔加满稀释后的洗涤液，静置1分钟后弃去，重复此操作洗涤5次，最后在吸水纸上充分拍干孔内残留液体。

    四、加酶与显色

    除空白孔外，每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，重新封板后37℃温育60分钟（部分简化试剂盒此处为30分钟，以说明书为准）。

    重复洗涤步骤5次，充分拍干。

    每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育15分钟。

    五、终止与读数

    孵育完成后，每孔加入终止液50μL，终止反应。

    加入终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长下测定每孔的吸光度（OD值）。

    六、结果计算

    以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本OD值从标准曲线查出对应的浓度，再乘以样本的稀释倍数，得到最终样本中IL-35的实际浓度。

    注：以上科研产品资料供参考!

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