ELISA实验操作要点：样本收集及保存操作不当会影响实验结果

　　一、样本收集不当的影响

　　假阳性结果‌：严重溶血时，血红蛋白自带过氧化物酶活性，会催化底物非特异性显色;样本被细菌污染，菌体含内源性HRP，也会引发假阳性。

　　假阳性干扰‌：血液未全凝固就强行离心，残留的纤维蛋白原会在孔内形成絮状沉淀，难以洗净，直接造成假阳性结果。

　　结果偏差‌：用含EDTA、NaN₃的容器收集样本，会抑制辣根过氧化物酶活性，导致显色偏弱，出现假阴性。

　　二、样本保存不当的影响

　　目标物降解‌：样本反复冻融、长期在室温放置，会让待测蛋白变性失活，浓度大幅降低，最终得到假阴性结果。

　　非特异性升高‌：4℃存放超过5天，血清中IgG会发生聚合，间接法实验的本底值明显升高，干扰结果判读。

　　样本污染变质‌：未密封存放的样本易被交叉污染，不同批次样本间相互干扰，大幅增加实验随机误差。

　　三、规范操作要点

　　收集环节‌：血清用无热原试管采集，室温放置2小时待凝固后，3000转离心10分钟分离上清，全程避免溶血。

　　保存环节‌：按单次检测用量分装，短期2-8℃存放不超过5天，长期冻存于-20℃/ -80℃，严格杜绝反复冻融。

　　复融环节‌：冻存管冻存样本在15-25℃水浴快速复融，混匀后再次离心去除沉淀，再用于后续检测。

　　注：以上科研产品资料供参考!

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