BUNSEN本生阐述：关于小鼠ELISA试剂盒的操作方法

BUNSEN本生的小鼠ELISA试剂盒操作方法主要分为‌双抗体夹心法‌和‌间接法‌两类，两类方法的操作步骤均经过标准化验证，适配小鼠样本的检测需求，具体操作流程如下：

一、双抗体夹心法操作步骤

该方法适用于检测小鼠样本中的大分子抗原，是小鼠ELISA试剂盒常用的操作模式。

包被‌：用0.05M pH9.6碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量1——10μg/ml，每个聚苯乙烯板反应孔加0.1ml，4℃过夜，次日弃去孔内溶液，洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。

加样‌：加入0.1ml稀释后的待检样品，37℃孵育1小时后洗涤，同步设置空白孔、阴性对照孔及阳性对照孔。

加酶标抗体‌：各反应孔加入0.1ml新鲜稀释的酶标抗体，37℃孵育0.5——1小时后洗涤。

显色‌：各反应孔加入0.1ml临时配制的TMB底物溶液，37℃避光反应10——30分钟。

终止反应‌：各反应孔加入2M硫酸0.05ml终止显色。

结果判定‌：可肉眼观察颜色深浅用“+"“~"标记阴阳结果，也可在ELISA检测仪450nm波长下测OD值，OD值大于阴性对照2.1倍即为阳性。

二、间接法操作步骤

该方法适用于检测小鼠样本中的特异性抗体，操作流程与夹心法有部分差异。

包被‌：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1——10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜后洗涤3次。

加样‌：加入0.1ml稀释后的待检未知抗体样品，37℃孵育1小时后洗涤，同步设置空白、阴性及阳性对照孔。

加酶标二抗‌：各反应孔加入0.1ml新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体），37℃孵育35-60分钟后洗涤，最后一遍用双蒸水洗涤。

后续显色、终止、结果判定步骤‌：与双抗体夹心法的第4、5、6步一致。

注：以上资料仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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