大鼠抗凝血酶受体(ATR)Elisa试剂盒操作步骤

　　大鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒采用‌双抗体夹心法‌，全程约3.5-5小时，操作是严格控制孵育时间与洗涤规范，保证结果重复性。

　　实验前准备

　　所有试剂提前从2-8℃冰箱取出，‌室温平衡20分钟‌，避免温差影响反应效率。

　　50×浓缩洗涤液用蒸馏水按1:50稀释，若有盐析出可37℃水浴助溶。

　　提前准备好校准的移液器、450nm酶标仪、37℃恒温箱、一次性无菌吸头。

　　样本处理规范

　　血清‌：血液自然凝固后，1000×g离心10分钟分离上清，避免溶血。

　　血浆‌：EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝，1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　组织匀浆‌：样本称重后加pH7.4的PBS匀浆，2000-3000转离心20分钟取上清。

　　暂不检测的样本分装后-20℃冻存，避免反复冻融。

　　操作步骤

　　从铝箔袋中取出所需板条，剩余板条密封放回4℃保存。

　　设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加梯度稀释后的标准品50μL，样本孔加预处理后的待测样本50μL。

　　除空白孔外，每孔加入50μL生物素标记抗体，封板膜密封后‌37℃温育1小时‌。

　　甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒后拍干，重复洗板3-5次，手工洗板每次浸泡1分钟。

　　每孔加入80μL亲和链酶素-HRP，封板后‌37℃温育30分钟‌。

　　重复上述洗板操作3-5次，充分拍干孔内残留液体。

　　每孔加入底物A、B各50μL，轻轻混匀后‌37℃避光孵育10-15分钟‌。

　　每孔快速加入50μL终止液，15分钟内用酶标仪在‌450nm波长‌处测定各孔OD值。

　　关键注意事项

　　不同批号试剂禁止混用，一次性吸头避免交叉污染。

　　底物B对光敏感，避免长时间暴露于强光下。

　　样本中不可添加NaN3.否则会抑制HRP酶活性导致结果偏低。

　　板内、板间变异系数需控制在‌10%以内‌，保证结果重复性。

　　注：以上科研产品资料供参考，具体请咨询!

　　本生BUNSEN一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。