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小鼠酪蛋白β(β-CN)ELISA试剂盒实验使用说明书
发布时间:2025/1/9浏览:309次
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  小鼠酪蛋白β(β-CN)ELISA试剂盒实验使用说明书主要包括以下关键步骤和注意事项‌:

  ‌实验准备‌

  试剂盒应保存在2-8℃条件下,使用前需室温平衡20分钟‌。

  准备必要的实验器材,如酶标仪(450nm)、高精度加样器及枪头、37℃恒温箱等‌。

  ‌样本收集与处理‌

  血清:使用不含热原和内毒素的试管收集血液,3000转离心10分钟分离血清和红细胞‌。

  血浆:采用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟取上清‌。

  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物‌。

  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎,3000转离心10分钟取上清‌。

  若样本不及时检测,应按一次用量分装并冻存于-20℃‌。

  ‌实验步骤‌

  ‌加样‌:在酶标包被板上设定标准品孔、待测样品孔和空白孔。标准品设定5个浓度点,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓度的标准品;待测样品孔先加样品稀释液40微升,再加待测样品10微升(最终稀释度为5倍);空白孔加入50微升蒸馏水‌。

  ‌温育‌:用封板膜封板后置37℃温育30分钟‌。

  ‌配液‌:将浓缩洗涤液按倍数稀释后备用‌。

  ‌洗涤‌:揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次,拍干‌。

  ‌加酶‌:每孔(除空白孔外)加入酶标试剂50微升‌。

  ‌再次温育‌:操作同温育步骤‌。

  ‌再次洗涤‌:操作同洗涤步骤‌。

  ‌显色‌:每孔先加入显色剂A50微升,再加入显色剂B50微升,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟‌。

  ‌终止‌:每孔加终止液50微升,终止反应(颜色由蓝转黄)‌。

  ‌测定‌:以空白孔调零,在450nm波长下依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行‌。

  ‌注意事项‌

  试剂盒仅用于科学研究,不得用于医学诊断‌。

  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封并低温干燥保存‌。

  标准品稀释液和浓缩洗涤液在使用前应确保溶解,避免结晶影响实验结果‌。

  实验过程中需严格遵守操作规程,确保实验结果的准确性。

  请根据实际使用的试剂盒品牌和说明书进行具体操作,如有差异请遵循产品说明书。


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