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以下是关于小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA试剂盒的实验使用说明:
BS-2216 小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA试剂盒
一、实验原理
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。预先包被sMHC-2捕获抗体的微孔中依次加入标本、标准品和HRP标记检测抗体,经温育洗涤后,通过TMB显色反应测定吸光度(OD值),颜色深浅与sMHC-2浓度呈正相关。
二、试剂盒组成
微孔酶标板:预包被抗体(96孔或48孔配置)
标准品:浓度梯度溶液(通常0.3mL×6管)
检测抗体-HRP:辣根过氧化物酶标记物(10mL/5mL)
洗涤缓冲液:20×浓缩液需稀释使用
显色液:底物A/B各3-6mL
终止液:酸性溶液(6mL/3mL)
三、样本处理
血清:血液离心1000-3000×g 10分钟,避免溶血;
血浆:EDTA/肝素抗凝,离心后取上清;
组织匀浆:按1:9比例加PBS匀浆,3000×g离心10分钟;
保存:分装冻存于-20℃,避免反复冻融。
四、操作步骤
平衡:取出板条室温平衡20分钟,剩余板条密封4℃保存;
加样:
空白孔:不加样
标准品孔:50μL不同浓度标准品
样本孔:50μL待测样本;
孵育:加入HRP检测抗体100μL,37℃孵育60分钟;
洗涤:用洗涤液洗板5次,拍干;
显色:每孔加底物A/B各50μL,37℃避光反应15分钟;
终止:加终止液50μL,15分钟内测450nm OD值。
五、注意事项
有效期:未开封试剂盒通常6个月(2-8℃保存);
线性范围:需按说明书标曲浓度操作,超出范围可能导致误差;
应用限制:仅限科研使用,不可用于临床诊断。
如需具体品牌试剂盒的完整说明书,可参考厂商提供的详细文档(如本生BS-2216或天正信达TZXD-2216)。