以下是植物花色苷合成酶(ANS)ELISA试剂盒的实验使用说明综合整理：

　　BS-4985  植物花色苷合成酶(ANS)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被植物花色苷合成酶(ANS)抗体的酶标板孔中，依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。TMB底物显色后，在450nm波长下测定吸光度(OD值)，颜色深浅与样品中ANS浓度呈正相关‌。

　　二、试剂盒组成

　　• 微孔酶标板：12孔×8条(96T)或12孔×4条(48T)

　　• 标准品：0.3mL×6管

　　• 检测抗体-HRP：10mL(96T)/5mL(48T)

　　• 底物A/B：各6mL(96T)/3mL(48T)

　　• 终止液：6mL(96T)/3mL(48T)

　　• 20×洗涤缓冲液：25mL(96T)/15mL(48T)‌

　　三、样本处理

　　液体样本：

　　血清：室温凝固10-20分钟后，2000-3000转/分离心20分钟取上清

　　血浆：用EDTA或肝素抗凝后离心

　　组织样本：按1:5-10比例(mg:μL)加入提取液匀浆，8000g离心10分钟取上清‌

　　四、操作步骤

　　试剂准备：

　　提前20分钟取出试剂盒平衡至室温

　　20×洗涤液按1:19用蒸馏水稀释‌

　　加样：

　　标准孔：加50μL系列浓度标准品

　　样本孔：先加40μL稀释液，再加10μL样本(最终稀释5倍)‌

　　孵育：37℃温育60分钟

　　洗涤：弃液体，每孔加满洗涤液静置30秒后弃去，重复5次

　　显色：每孔加底物A/B各50μL，37℃避光显色15分钟

　　终止：每孔加50μL终止液‌

　　五、结果计算

　　• 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　• 根据样本OD值在标准曲线上推算浓度‌

　　六、注意事项

　　保存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，有效期6个月

　　浓缩洗涤液出现结晶属正常现象，需溶解后使用

　　OD值>1时应加大稀释倍数，<0.1时缩小稀释倍数‌

　　不同批次试剂盒组分不可混用‌

　　(注：具体操作请以实际购买的试剂盒说明书为准)

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