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以下是关于大鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南:
BS-3471 大鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒
一、实验原理
采用双抗体夹心法:用纯化的大鼠sLR抗体包被微孔板形成固相抗体,依次加入样本、HRP标记的抗体,形成复合物后通过TMB显色,颜色深度与样本中sLR浓度正相关。
二、试剂盒组成
预包被微孔板:含固相抗体
标准品:浓度梯度通常为80、40、20、10、5、2.5 U/L
检测抗体:HRP标记的sLR抗体
显色底物:TMB溶液
终止液:酸性溶液(如2M H₂SO₄)
洗涤缓冲液:PBS或TBS配方
三、样本处理要求
样本类型:血清、血浆(肝素/EDTA抗凝)、组织匀浆液
采集注意事项:
避免溶血,室温血液凝固10-20分钟后离心(2000-3000 rpm,20分钟)
长期保存需-20°C分装,避免反复冻融
稀释建议:通常按1:5~1:20稀释,高浓度样本需进一步稀释
四、实验步骤
加样:
每孔加入50μL标准品或样本,设双复孔
孵育:37°C温育1小时,洗涤3次
酶标抗体结合:加入HRP标记抗体,37°C孵育30分钟
显色:加入TMB底物避光反应15分钟
终止与检测:加终止液后15分钟内测450nm OD值
五、注意事项
质量控制:
每板需设空白孔、标准曲线孔和质控样本
标准曲线R²应≥0.99
操作规范:
避免底物接触金属器械,终止液有腐蚀性需防护
开封后未用完板条需密封干燥保存
数据计算:
以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制曲线,用四参数拟合计算样本浓度
六、技术参数
检测范围:通常2.5-80 U/L
灵敏度:<1.0 U/L(不同品牌可能有差异)
批内/批间差:CV<10%
如需具体品牌(如天津本生、天正信达生物等)的差异说明,可进一步提供补充信息。
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