以下是关于大鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA试剂盒的实验使用说明：

　　BS-3461   大鼠新生甲状腺素(NN-T4)ELISA试剂盒

　　一、检测原理

　　采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入预先包被NN-T4抗体的酶标板中，经温育后形成抗体-抗原复合物，洗涤后加入酶标工作液，再次温育后形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。加入底物TMB显色，颜色深浅与NN-T4浓度呈正相关。

　　二、样本要求

　　血清/血浆‌：采集后室温静置2小时或4℃过夜，1000g离心20分钟取上清，避免反复冻融。

　　组织匀浆‌：用预冷PBS(0.01M, pH=7.4)按1:9重量体积比匀浆，5000×g离心5-10分钟取上清。

　　注意事项‌：含NaN3的样本会抑制HRP活性，需避免使用。

　　三、实验步骤

　　试剂准备‌：将浓缩洗涤液稀释30倍，标准品按说明书稀释。

　　加样‌：标准品和样本分别加入对应孔位，建议做复孔。

　　孵育‌：37℃温育60分钟，洗涤去除未结合物。

　　加酶标抗体‌：加入HRP标记抗体，再次温育30分钟并洗涤。

　　显色‌：加入TMB底物A/B液，避光反应15分钟。

　　终止与检测‌：加终止液后，450nm波长测OD值。

　　四、数据处理

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　根据样本OD值计算NN-T4浓度，板内/板间变异系数应<10%。

　　五、注意事项

　　试剂盒需2-8℃保存，有效期通常为6个月。

　　显色时间需严格控制，避免过度反应。

　　实验环境需清洁，避免交叉污染。

　　如需更详细的参数(如标准品浓度范围、线性回收率等)，建议参考试剂盒配套说明书。

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