人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒使用说明

　　BS-0182  人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒

　　实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术，通过将纯化的EGF捕获抗体包被于微孔板形成固相抗体，依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经洗涤后加入TMB底物显色，在HRP酶催化下产生蓝色产物，酸化后转为黄色，颜色深度与样本中EGF浓度呈正相关，最终在450nm波长下测定OD值。

　　试剂盒组成与样本处理

　　样本类型‌：适用于血清、血浆(EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝)、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物液体

　　样本保存‌：2-8℃可保存48小时，长期保存需-20℃或-70℃冷冻，避免反复冻融

　　样本稀释‌：尿液至少需20倍稀释(10μl样本+190μl稀释液)，血清/血浆可能需要预实验确定稀释倍数

　　标准品配制‌：使用前加1ml蒸馏水配成20ng/ml溶液，通过系列倍比稀释(从900μl稀释液开始)建立标准曲线

　　检测程序

　　加样‌：空白孔加50μl稀释液，其余孔加50μl标准品或待测样本，37℃孵育40分钟

　　洗涤‌：使用1×洗涤液充分洗涤4-6次，每孔350μl，每次浸泡1-2分钟后拍干

　　加检测抗体‌：空白孔加100μl抗体稀释液，其余孔加100μl生物素化抗体工作液，37℃孵育30分钟

　　加SABC复合物‌：每孔100μl，37℃孵育20分钟

　　显色‌：加100μl TMB底物，37℃避光反应10-20分钟(显色时间需根据实际情况调整)

　　终止与读数‌：每孔加100μl终止液，30分钟内在450nm波长测定OD值

　　技术参数

　　检测范围‌：3.9-250pg/mL(典型范围，不同品牌有差异)

　　灵敏度‌：1.53-1.6pg/mL

　　重复性‌：板内变异系数<10%，板间变异系数<10%

　　特异性‌：与人EGF类似物无明显交叉反应

　　注意事项

　　所有试剂使用前需恢复至室温，液体组分充分混匀

　　严格避免泡沫产生和交叉污染，不同浓度样本需更换枪头

　　洗涤步骤对结果准确性至关重要，需确保洗涤充分

　　底物溶液变为蓝色表明失效，不得使用

　　剩余板条应立即密封保存于干燥环境，建议1个月内用完

　　实验废弃物应按传染物规范处置

　　建议标准品和样本做双孔检测，每次实验都需建立标准曲线

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