以下是关于人胃促生长素(Ghrelin)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南：

　　一、实验原理

　　双抗体夹心法‌：采用包被抗体的微孔板捕获样本中的Ghrelin，通过HRP标记检测抗体形成复合物，TMB显色后测定OD值。

　　竞争法‌(部分试剂盒)：样本中Ghrelin与标记抗原竞争结合抗体，OD值与浓度呈负相关。

　　二、样本处理

　　类型‌：血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞上清液、组织匀浆。

　　采集要求‌：

　　血清/血浆：4℃下3000转离心10-30分钟，避免溶血。

　　组织样本：需用生理盐水匀浆后离心取上清。

　　保存‌：2-8℃可存48小时，长期保存需-20℃分装，避免反复冻融。

　　三、试剂盒组成

　　包被微孔板、标准品(需用蒸馏水稀释)、HRP标记抗体、TMB底物、终止液、洗涤缓冲液(20倍浓缩需稀释)。

　　部分试剂盒含生物素化抗体及链霉亲和素-HRP。

　　四、操作步骤

　　平衡试剂‌：所有组分需室温平衡15-30分钟。

　　加样‌：

　　标准品梯度稀释(如10-1280 ng/ml)。

　　样本按1:100稀释(如10μl样本+1ml稀释液)。

　　孵育‌：37℃温育1小时，底洗涤3-5次。

　　显色‌：加入TMB底物，避光反应15分钟，硫酸终止。

　　检测‌：酶标仪450nm读取OD值，绘制标准曲线计算浓度。

　　五、注意事项

　　质量控制‌：板内/板间变异系数应<10%，回收率需达81%以上。

　　干扰避免‌：

　　避免孔内液体残留影响洗涤效果。

　　底物变蓝或过期不可使用。

　　保存条件‌：未使用试剂2-8℃保存，避免强光照射。

　　六、典型数据

　　检测范围‌：0.78-50 pg/mL(竞争法)或更高浓度(夹心法)。

　　灵敏度‌：可达0.32 pg/mL。

　　不同品牌试剂盒可能存在细节差异，建议以具体产品说明书为准。

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