以下是关于人血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南：

　　BS-10001  人血管内皮生长因子(VEGF)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法，通过预包被在酶标板上的抗VEGF抗体捕获样本中的VEGF，再与HRP标记的检测抗体形成复合物，经TMB显色后测定OD值，浓度与颜色深浅成正比。

　　二、试剂盒组成

　　核心组分‌：预包被酶标板(96孔)、标准品(40ng/瓶)、HRP标记抗体、TMB底物、终止液

　　辅助溶液‌：20×浓缩洗涤液(需1:20稀释)、10×标本稀释液(需1:10稀释)

　　三、样本处理

　　血清/血浆‌：3000rpm离心10-30分钟，避免反复冻融

　　细胞上清‌：离心去除颗粒物，分装保存于-20℃

　　组织匀浆‌：生理盐水捣碎后离心取上清

　　四、标准品配制

　　标准品用1ml蒸馏水复溶(40ng/ml)

　　梯度稀释：依次进行对倍稀释(62.5-2000pg/mL)

　　五、实验步骤

　　加样‌：标准品/样本各100μL，37℃温育2小时

　　洗涤‌：手工洗板需浸泡1-2分钟，重复3-5次，拍干

　　显色‌：

　　加TMB底物90μL，避光反应15-25分钟

　　终止反应后立即测定450nm OD值

　　六、注意事项

　　保存条件‌：试剂盒2-8℃保存，使用前室温平衡60分钟

　　交叉污染‌：使用一次性吸头，避免金属接触终止液

　　质量控制‌：板内变异系数<10%，板间<15%

　　七、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线，通过回归方程计算样本浓度。

　　注：本试剂盒仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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