以下是关于人第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南：

　　BS-0195  人第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法检测样本中FⅧAg含量。具体步骤为：

　　用纯化抗体包被微孔板形成固相抗体

　　依次加入待测样本和HRP标记抗体

　　形成抗体-抗原-酶标抗体复合物后，TMB显色系统产生颜色反应

　　二、试剂盒组成

　　典型配置包含(不同品牌可能略有差异)：

　　酶标包被板(96T/48T)

　　FⅧAg标准品(通常含40μg/ml原液)

　　酶标试剂(HRP标记抗体)

　　显色液(TMB A/B液)

　　终止液(酸性溶液)

　　20×浓缩洗涤缓冲液

　　三、样本要求

　　适用样本类型：人血清、血浆及相关液体样本

　　保存要求：

　　新鲜样本需立即检测

　　冻结样本应充分混匀后使用

　　避免反复冻融和细菌污染

　　四、操作步骤

　　标准品稀释‌：用标准品稀释缓冲液进行梯度稀释

　　加样‌：

　　每孔加入100μl标准品或样本

　　37℃温育90分钟

　　洗涤‌：弃液体后用洗涤液洗板5次

　　加酶标抗体‌：每孔加100μl HRP标记抗体

　　显色‌：

　　加入TMB显色液(A+B液等体积混合)

　　避光反应15-30分钟

　　终止‌：每孔加50μl终止液

　　检测‌：450nm波长读取OD值

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　通过回归方程计算样本浓度(需乘以稀释倍数)

　　六、注意事项

　　试剂使用前需平衡至室温(25-37℃)

　　严格避免：

　　不同批次试剂混用

　　显色液接触金属器具

　　酶标板干燥

　　质量控制：

　　建议所有样本做双孔检测

　　每板设置空白对照

　　安全防护：

　　避免直接接触终止液和显色液

　　禁止用嘴吸取试剂

　　七、储存条件

　　未开封试剂盒应保存于2-8℃;开封后酶标板需密封保存并添加干燥剂。

　　(注：具体操作参数请以实际试剂盒说明书为准，不同厂家可能存在差异，以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师及供应商)。

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