以下是植物ACC合成酶(ACS)ELISA试剂盒的实验使用说明：

　　BS-7993  植物ACC合成酶(ACS)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。预先包被植物ACC合成酶(ACS)抗体的微孔板中依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体，经温育洗涤后，TMB底物在过氧化物酶催化下显色(蓝色→黄色)，颜色深浅与ACS含量呈正相关，通过450nm波长测定OD值计算浓度。

　　二、样本处理

　　血清‌：无热原试管采集，避免细胞刺激，1000×g离心10分钟分离;

　　血浆‌：EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝，3000×g离心30分钟取上清;

　　细胞上清液‌：3000×g离心10分钟去除颗粒;

　　组织匀浆‌：生理盐水捣碎后离心取上清;

　　保存‌：分装冻存于-20℃，避免反复冻融。

　　三、试剂盒组成

　　组分 规格 数量

　　30倍浓缩洗涤液 20ml 1瓶

　　酶标试剂 6ml 1瓶

　　酶标包被板 12孔×8条 1板

　　标准品 0.5ml 1瓶

　　显色剂A/B液 各6ml 各1瓶

　　终止液 6ml 1瓶

　　四、操作步骤

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释原倍标准品;

　　加样‌：

　　空白孔：不加样品

　　标准孔：50μl标准品

　　样本孔：40μl稀释液+10μl样本(5倍稀释);

　　温育‌：37℃孵育30分钟，封板膜覆盖;

　　洗涤‌：弃液后加满洗涤液，静置30秒重复5次，拍干;

　　显色‌：每孔加显色剂A/B液各50μl，37℃避光显色10分钟;

　　终止‌：每孔加50μl终止液;

　　检测‌：5分钟内于450nm读取OD值。

　　五、注意事项

　　试剂盒保存于2-8℃，使用前室温平衡20分钟;

　　浓缩洗涤液结晶需水浴加热溶解;

　　结果计算时需乘以稀释倍数(如5倍);

　　不同批号组分不可混用(洗涤液/终止液除外)。

　　六、自备器材

　　酶标仪(450nm)

　　移液器(0.5-1000μL范围)

　　37℃恒温箱。

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