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植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒实验使用说明书
发布时间:2025/5/26浏览:179次
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  以下是植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒的实验使用说明,综合了相关检测原理、操作步骤及注意事项:

  BS-8002 植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒

  检测原理‌

  采用双抗体夹心法:

  微孔板预包被LOX抗体形成固相抗体

  依次加入样本、HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物

  TMB显色后,颜色深浅与LOX活性呈正相关,450nm测OD值计算浓度

  试剂盒组成‌

  预包被微孔板

  标准品(通常含S0-S5浓度梯度)

  HRP标记抗体、TMB显色液、终止液

  浓缩洗涤液(需1:20稀释)

  样本处理‌

  组织样本‌:按1:5~10(质量:体积)加入提取液,冰浴匀浆后4℃ 15000g离心20min取上清

  保存要求‌:分装后-20℃冻存,避免反复冻融;NaN3会抑制HRP活性,需避免使用

  操作步骤‌

  标准品稀释‌:按说明书梯度稀释(如0-320 U/L)

  加样‌:

  分别加入标准品、样本各50μL至对应孔

  立即加入50μL HRP标记抗体,37℃孵育60min

  洗涤‌:手工洗板需加满洗涤液,静置1min后甩干,重复5次

  显色‌:

  每孔加TMB底物100μL,37℃避光显色15-30min

  加终止液50μL,颜色由蓝变黄

  检测‌:450nm测OD值,用标准曲线计算样本浓度

  注意事项‌

  试剂使用前需室温平衡20分钟,结晶需水浴溶解

  显色时间需严格控制,避免过度反应

  空白孔(S0)作为阴性对照,样本OD值需在标准曲线范围内

  结果计算‌

  样本浓度=标准曲线对应浓度×稀释倍数(若样本预先稀释需乘以相应系数)

  如需具体试剂盒的差异步骤,请参考对应产品的说明书。

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