兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4223  兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒

　　以下是天津本生‌兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒‌的标准化实验操作说明：

　　一、检测原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌：

　　包被抗兔CRP抗体捕获样本中的CRP;

　　加入生物素化抗体形成复合物，再结合HRP标记链霉亲和素;

　　TMB显色，OD450nm吸光度值与CRP浓度正相关。

　　二、试剂盒组成‌

　　组分 保存条件 规格与备注

　　预包被微孔板 4℃干燥 96孔(可拆卸)

　　CRP标准品 -20℃(冻干粉) 浓度梯度：39-5000 ng/mL

　　HRP标记检测抗体 4℃避光 含辣根过氧化物酶

　　TMB显色液A/B 4℃避光 现配现用

　　终止液 室温 显色终止

　　20×浓缩洗涤液 室温 使用前稀释

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌：

　　全血室温静置2小时或4℃过夜，离心(1000×g，20分钟)取上清;

　　避免溶血或反复冻融。

　　组织匀浆‌：

　　按重量比加入PBS匀浆，离心(3000 rpm，10分钟)取上清。

　　细胞培养上清‌：直接离心去除沉淀。

　　四、实验步骤‌

　　标准品稀释‌：

　　冻干标准品用稀释液复溶，梯度稀释为2500 ng/mL至39 ng/mL。

　　加样与孵育‌：

　　每孔加入50μL样本或标准品，37℃孵育30分钟;

　　洗涤5次(手动或自动洗板机)。

　　显色与检测‌：

　　加入TMB显色液(A/B各50μL)，避光反应15分钟;

　　加终止液50μL，立即450nm测OD值。

　　五、数据分析‌

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线;

　　样本浓度=曲线对应值×稀释倍数。

　　六、注意事项‌

　　质量控制‌：

　　空白孔OD值应<0.1，板内变异系数<10%;

　　避免NaN3污染(抑制HRP活性)。

　　保存条件‌：

　　未开封试剂盒2-8℃保存6个月，开封后尽快使用。

　　七、常见问题‌

　　边缘效应‌：温育时使用水浴或预热板/试剂至37℃以消除;

　　无信号‌：检查酶标抗体活性及洗涤是否。

　　BS-4223兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 天津本生

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际应用。如需具体品牌试剂盒的差异操作(如本生、天正信达等)，建议参考对应说明书。

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