猪支原体抗体(MAb)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　以下是猪支原体抗体(MAb)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南：

　　BS-4652  猪支原体抗体(MAb)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗原夹心法或间接法ELISA技术，通过包被抗原与样本中抗体结合，再与HRP标记抗原/抗体形成复合物，经TMB显色后测定450nm吸光度(OD值)，颜色深浅与抗体浓度呈正相关。

　　二、试剂盒组成

　　预包被微孔板

　　标准品(冻干粉，需复溶)

　　酶标试剂(HRP标记物)

　　浓缩洗涤液(20-30倍稀释使用)

　　TMB显色底物

　　终止液(酸性溶液)

　　说明书及质检报告

　　三、样本处理要求

　　血清‌：室温凝固2小时或4℃过夜后离心(1000×g, 20分钟)，避免溶血或反复冻融。

　　血浆‌：EDTA/肝素抗凝，30分钟内离心(1000×g, 15分钟)。

　　组织匀浆‌：按1:9比例用PBS匀浆，离心取上清。

　　四、标准品稀释步骤

　　复溶：加入1mL稀释液溶解冻干标准品(10,000pg/mL母液)。

　　梯度稀释：按说明书进行倍比稀释(如5,000→2,500→...→78pg/mL)，标准品稀释液作空白对照。

　　五、实验操作流程

　　加样‌：

　　标准品孔：50μL不同浓度标准品(双复孔)

　　样本孔：50μL待测样本。

　　孵育‌：37℃温育60分钟，洗板5次(每孔350μL洗涤液)。

　　显色‌：每孔加TMB底物50μL，37℃避光反应15分钟。

　　终止‌：加终止液50μL，15分钟内测OD450值。

　　六、注意事项

　　试剂平衡：使用前室温平衡30分钟，浓洗涤液需水浴助溶。

　　质量控制：批内CV<10%，批间CV<12%。

　　干扰因素：细菌污染、反复冻融、溶血会导致假阳性/假阴性。

　　结果判读：建议用四参数拟合标准曲线计算浓度。

　　七、常见问题

　　显色异常‌：检查显色剂有效期及避光情况。

　　洗板误差‌：确保充分洗涤，避免孔间交叉污染。

　　标准曲线异常‌：检查稀释准确性及酶标仪校准。

　　(注：具体操作参数请以试剂盒最新说明书为准)

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师及品牌供应商!

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