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牛热休克蛋白-70抗体(HSP-70-Ab)ELISA试剂盒实验使用说明书
以下是牛热休克蛋白-70抗体(HSP-70-Ab)ELISA试剂盒的实验使用说明摘要:
BS-3989 牛热休克蛋白-70抗体(HSP-70-Ab)ELISA试剂盒
一、实验原理
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。通过包被抗体捕获样本中的HSP-70-Ab,加入HRP标记检测抗体后,经TMB显色反应,颜色深浅与目标物浓度成正比。
二、试剂盒组成
主要组分:
预包被微孔板(96孔)
冻干标准品(通常含2瓶,需用稀释液 reconstitute 至10 ng/mL)
样品稀释液(20mL)
HRP标记检测抗体(120μL,需1:100稀释)
TMB显色底物(A/B液分装)
终止液(2N H2SO4)
自备物品:
酶标仪(450nm滤光片)
微量移液器及吸头
37℃恒温箱
三、样本处理
血清/血浆:3000rpm离心10-30分钟,避免溶血或反复冻融。
组织匀浆:生理盐水匀浆后离心取上清。
保存:分装后-20℃冻存,避免反复冻融。
四、操作步骤
试剂平衡:所有组分室温平衡15-30分钟。
标准品稀释:从10 ng/mL起始进行倍比稀释(建议7个梯度)。
加样与孵育:
每孔依次加入样本/标准品(100μL)、检测抗体(50μL),37℃孵育60分钟。
洗涤:使用稀释后的洗涤液(1:25)洗板5次。
显色:加入TMB底物,避光反应15分钟。
终止与检测:加终止液后30分钟内测450nm OD值。
五、注意事项
浓洗涤液结晶可37℃水浴溶解。
避免板条开封后受潮,未用完需密封保存。
不同批次试剂不可混用。
高浓度样本需预稀释(计算时乘以稀释倍数)。
六、结果计算
以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线,样本浓度通过曲线方程计算。
注:以上资料仅供参考,具体如需完整说明,建议联系供应商获取。
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