以下是山羊白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南：

　　BS-6400 山羊白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒

　　一、实验原理‌

　　采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。包被微孔中的捕获抗体与样本中的IL-1β结合后，依次加入HRP标记的检测抗体，经显色反应(TMB底物)后，通过450nm波长测定OD值，浓度与颜色深浅呈正相关。

　　二、试剂盒组成‌

　　微孔酶标板‌：预包被抗体的96孔板(可拆卸)

　　标准品‌：冻干粉(通常含6-8个浓度梯度，如10,000-156 pg/mL)，需用稀释液复溶

　　检测抗体‌：HRP标记的检测溶液A/B，需按1:100稀释

　　洗涤缓冲液‌：30倍浓缩液，使用前需蒸馏水稀释

　　显色底物‌：TMB(A/B液分装，避光保存)

　　终止液‌：2N H₂SO₄溶液

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌：

　　采集后3000×g离心10分钟(血清)或30分钟(血浆，需抗凝剂处理)

　　避免溶血或脂血，分装保存于-20℃，避免反复冻融

　　细胞上清/组织匀浆‌：

　　离心去除颗粒(3000×g，10分钟)，取上清检测

　　四、操作步骤‌

　　试剂平衡‌：所有组分室温平衡15-30分钟，浓缩洗涤液需溶解结晶(可水浴加温)

　　加样‌：

　　空白孔：不加样品

　　标准孔：50μL系列浓度标准品

　　样本孔：先加40μL稀释液，再加10μL样本(最终稀释5倍)

　　温育‌：37℃孵育30分钟，封板膜覆盖

　　洗涤‌：弃液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干

　　加酶标抗体‌：每孔50μL HRP标记抗体(空白孔除外)

　　显色‌：避光加入TMB A/B液各50μL，37℃显色10分钟(蓝色→黄色)

　　终止与检测‌：每孔加50μL终止液，立即用酶标仪测450nm OD值

　　五、注意事项‌

　　质量控制‌：每次实验需做标准曲线及复孔，批内/批间CV应<12%

　　干扰因素‌：避免细菌污染(内源性HRP导致假阳性)、溶血或反复冻融

　　保存条件‌：未使用的板条需密封防潮，试剂2-8℃保存，禁止冷冻

　　六、结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，样本浓度通过曲线方程计算后乘以稀释倍数。若样本OD值超出标准曲线范围，需进一步稀释后重测。

　　注：以上资料仅供参考，如需更详细的参数(如灵敏度、检测范围)，请参考具体说明或是咨询供应品牌商。

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