大鼠E钙黏蛋白上皮钙黏蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒实验说明书

　　以下是天津本生关于大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒的实验说明书要点整理：

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法：用纯化的大鼠E-Cad抗体包被微孔板，依次加入样本抗原和HRP标记的抗体，形成复合物后通过TMB显色，颜色深浅与样本中E-Cad浓度正相关。

　　二、试剂盒组成

　　预包被抗体的96孔板

　　标准品(通常含400ng/ml冻干品，需用稀释液重构)

　　生物素标记检测抗体、HRP标记亲和素

　　洗涤缓冲液(需蒸馏水稀释)

　　TMB底物溶液及终止液

　　三、操作步骤

　　样本准备‌

　　血清/血浆：离心去除颗粒，避免反复冻融。

　　组织匀浆：建议稀释5,000倍后检测。

　　标准品稀释‌

　　按说明书梯度稀释(如400→200→100→50→25→12.5→6.25 pg/ml)，空白孔用稀释液作为0标准。

　　加样与孵育‌

　　每孔加50μL标准品或样本，再依次加入检测抗体(100μL)，37℃孵育60分钟。

　　洗板5次(手工洗板需拍干，避免交叉污染)。

　　显色与终止‌

　　每孔加底物A/B各50μL，避光反应15分钟。

　　加入终止液后15分钟内测450nm OD值。

　　四、注意事项

　　样本处理‌：溶血或脂血样本需离心澄清;细菌污染可能导致假阳性。

　　实验环境‌：避免阳光直射，显色后需避光。

　　质量控制‌：建议标准品和样本做复孔，计算平均值。

　　保存条件‌：开封后未用完板条需密封干燥保存;试剂长期不用需-20℃存放。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线，用四参数拟合方程计算样本浓度。

　　六、技术参数

　　检测范围‌：通常为6.25-400 pg/ml(不同品牌可能有差异)。

　　灵敏度‌：<15 pg/ml。

　　特异性‌：不与大鼠其他蛋白交叉反应。

　　注：以上资料仅供参考，如需完整说明书，建议联系供应商获取随货文件。

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