以下是兔子表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒的实验室使用说明综合指南：

　　BS-4200 兔子表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 天津本生

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法ELISA技术，通过包被抗兔EGF抗体捕获样本中的目标蛋白，依次加入HRP标记检测抗体和TMB底物显色，颜色深度与EGF浓度呈正相关。

　　二、试剂盒组成

　　组分 96孔配置 48孔配置

　　预包被微孔板 1×96 1×48

　　标准品(冻干粉) 0.5ml×1 0.5ml×1

　　HRP标记抗体 6ml 3ml

　　TMB显色液 A/B液各6ml A/B液各3ml

　　20×洗涤缓冲液 25ml 15ml

　　终止液 6ml 3ml

　　三、样本处理要求

　　血清/血浆‌：采集后30分钟内2-8℃离心(1000×g,20分钟)，-20℃保存避免反复冻融

　　组织匀浆‌：按1:9比例加入PBS匀浆，5000×g离心5-10分钟取上清

　　细胞上清‌：1000×g离心20分钟去除沉淀

　　四、标准品配制

　　加入1ml蒸馏水复溶冻干标准品，配成480pg/ml母液

　　倍比稀释建立标准曲线(建议浓度梯度：480/240/120/60/30/0 pg/ml)

　　五、检测步骤

　　加样‌：标准品/样本各加100μl，37℃孵育120分钟

　　洗涤‌：1×洗涤液洗板4-6次，每次浸泡1-2分钟

　　加酶标抗体‌：100μl/孔，37℃孵育60分钟

　　显色‌：加TMB避光反应10-20分钟

　　终止‌：加终止液后30分钟内450nm测OD值

　　六、注意事项

　　所有试剂使用前需平衡至室温

　　避免溶血/脂血样本影响结果

　　显色液变蓝即失效，不可使用

　　不同批次试剂不可混用

　　七、技术参数

　　检测范围：15-480 pg/mL

　　灵敏度：<15 pg/mL

　　板内/板间变异系数：<10%

　　注：以上资料仅供参考，建议实验时设置复孔并同步制作标准曲线。具体操作细节可能因品牌差异需参考对应说明书。

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