大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-3177 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒

　　以下是关于大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒的实验使用说明书，综合了多个来源的操作步骤和注意事项：

　　一、试剂盒组成

　　预包被板‌：96孔或48孔微孔板，已包被抗Casp-9抗体‌。

　　标准品‌：冻干粉形式，需用稀释液复溶，浓度通常为2000 pg/mL，需倍比稀释成梯度浓度‌。

　　检测溶液‌：包括生物素标记抗体(检测溶液A)、酶标二抗(检测溶液B)‌。

　　洗涤液‌：30倍浓缩液，需用蒸馏水稀释‌。

　　显色底物(TMB)与终止液‌：避光保存，显色后需立即终止反应‌。

　　二、样本处理

　　血清/血浆‌：采集后室温静置10-20分钟，离心(2000-3000 rpm，20分钟)取上清，避免溶血或脂血‌。

　　组织匀浆‌：按重量比加入PBS匀浆，离心后取上清，分装保存于-20℃‌。

　　细胞上清‌：离心去除颗粒，冻存前避免反复冻融‌。

　　三、实验步骤

　　加样‌：

　　每孔加入50μL标准品或待测样本(建议复孔)，随后加入50μL生物素标记抗体‌。

　　37℃孵育1小时，洗涤3次(手工操作或洗板机)‌。

　　酶标反应‌：

　　加入80μL亲和链酶素-HRP，37℃孵育30分钟，再次洗涤‌。

　　显色与终止‌：

　　每孔加入底物A/B各50μL，避光孵育10分钟，立即加入50μL终止液‌。

　　读数‌：

　　使用酶标仪在450 nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度‌。

　　四、注意事项

　　试剂保存‌：未开封试剂盒-20℃保存，开封后酶标板需密封防潮，TMB和终止液需4℃避光‌。

　　操作规范‌：避免泡沫产生，加样时需精准;洗涤需，防止非特异性结合‌。

　　质量控制‌：建议每次实验设置空白孔和复孔，标准曲线R值应≥0.95‌。

　　样本要求‌：反复冻融不超过3次，组织样本需新鲜处理或液氮速冻‌。

　　五、常见问题

　　显色异常‌：可能因酶标抗体失效或洗涤不充分，需检查试剂有效期和操作步骤‌。

　　背景过高‌：封闭不或样本中干扰物质过多，可优化封闭液浓度或稀释样本‌。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体操作请以实际试剂盒说明书为准或咨询品牌商‌。

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