大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒使用说明书

　　BS-2952大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒 天津本生

　　一、试剂盒原理

　　大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测。该方法基于特异性抗体与PDGF分子的结合反应，通过酶催化底物显色来定量测定样本中PDGF的含量‌。

　　实验原理具体为：将抗大鼠PDGF单克隆抗体预先包被在酶标板上，加入标准品或样本后，其中的PDGF会与固相抗体结合。随后加入生物素化的检测抗体，形成"抗体-抗原-抗体"复合物。再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素与生物素结合，最后加入底物TMB显色。在HRP催化下，TMB显蓝色，加入终止液后变为黄色，颜色的深浅与样本中PDGF浓度成正比，通过测定450nm处的吸光度(OD值)即可计算出PDGF含量‌。

　　二、试剂盒组成

　　本试剂盒通常包含以下主要组分(具体组成可能因不同厂家有所差异)：

　　预包被酶标板‌：96孔或48孔，已包被抗PDGF抗体‌

　　PDGF标准品‌：冻干粉或溶液形式，浓度通常为2000-2700ng/L，使用前需用标准品稀释液重建‌

　　样品稀释液‌：用于稀释样本和标准品‌

　　生物素化检测抗体‌：特异性识别PDGF的抗体‌

　　酶结合物‌：HRP标记的链霉亲和素‌

　　TMB底物溶液‌：包含A液和B液，显色用‌

　　终止液‌：通常为硫酸溶液，用于终止反应‌

　　浓缩洗涤液‌：20×或25×浓缩，使用前需稀释‌

　　封板膜‌：防止蒸发和污染‌

　　三、样本收集与处理

　　1. 样本类型

　　本试剂盒适用于检测大鼠血清、血浆(EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝)、细胞培养上清液和组织匀浆等样本中的PDGF含量‌。

　　2. 样本收集

　　血清‌：全血室温放置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟取上清‌

　　血浆‌：使用抗凝管采集后30分钟内，1000×g离心15分钟‌

　　细胞上清‌：1000×g离心10分钟去除颗粒‌

　　组织匀浆‌：加入适量生理盐水匀浆后，1000×g离心10分钟取上清‌

　　3. 样本保存

　　样本在2-8℃可保存48小时，如需长期保存应分装后于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融‌。检测前血清样本通常需用稀释液作1:5至10倍稀释‌。

　　四、实验操作步骤

　　1. 试剂准备

　　标准品配制‌：将冻干标准品用1ml蒸馏水或标准品稀释液重建，按说明书进行系列稀释(通常设7-8个浓度梯度)‌

　　洗涤液配制‌：将浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20稀释(如1ml浓缩液加19ml水)‌

　　抗体工作液配制‌：按说明书比例用检测稀释液稀释生物素化抗体和酶结合物‌

　　2. 检测程序

　　加样‌：每孔加入100μl标准品或处理好的样本，设置空白对照孔‌

　　孵育‌：37℃温育30-120分钟(具体时间依试剂盒说明)‌

　　洗涤‌：弃去孔内液体，每孔加满洗涤液静置1分钟后弃去，重复4-6次，最后在吸水纸上拍干‌

　　加检测抗体‌：每孔加入100μl生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟‌

　　洗涤‌：同步骤3‌

　　加酶结合物‌：每孔加入100μl HRP标记的链霉亲和素，37℃孵育30分钟‌

　　洗涤‌：同步骤3‌

　　显色‌：每孔加入100μl TMB底物，37℃避光反应15分钟‌

　　终止‌：每孔加入100μl终止液，轻轻混匀‌

　　读数‌：30分钟内在酶标仪450nm处测定OD值(建议使用630nm作为参考波长)‌

　　五、结果计算

　　空白校正‌：所有OD值应减去空白对照孔的OD值‌

　　绘制标准曲线‌：以标准品浓度为横坐标(对数坐标)，相应OD值为纵坐标(线性坐标)，在坐标纸上绘制标准曲线‌

　　浓度计算‌：

　　根据样品OD值在标准曲线上查出对应的PDGF浓度‌

　　若样本经过稀释，需乘以相应的稀释倍数‌

　　也可通过回归方程计算浓度：使用标准品的浓度和OD值计算直线回归方程，将样本OD值代入方程求出浓度‌

　　六、注意事项

　　试剂保存‌：未使用的试剂应严格按说明书要求保存(通常2-8℃)，避免反复冻融‌

　　温度平衡‌：所有试剂和样本使用前应室温平衡30分钟‌

　　操作规范‌：

　　不同批号试剂不可混用‌

　　加样时避免触碰孔壁和产生气泡‌

　　严格控制各步骤的孵育时间和温度‌

　　洗涤要充分，防止交叉污染‌

　　样本处理‌：

　　避免使用溶血、高血脂或反复冻融的样本‌

　　组织样本应充分匀浆‌

　　安全防护‌：

　　TMB底物有毒性，终止液有腐蚀性，应避免接触皮肤‌

　　实验废弃物应按规定处理‌

　　七、性能参数

　　灵敏度‌：最小检测浓度通常小于15pg/ml‌

　　检测范围‌：常见为15.625-1000pg/ml或31.2-2000pg/ml‌

　　注：以上资料仅供参考，不作为具体依据，如果完整产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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