大鼠白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒实验使用说明书

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　　BS-2887 大鼠白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　该试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，通过包被抗IL-2R抗体的微孔板捕获样本中的IL-2R，再依次加入生物素标记抗体、HRP标记链霉亲和素和底物TMB显色，颜色深浅与IL-2R浓度成正比‌。

　　二、试剂盒组成

　　预包被微孔板(96孔或48孔配置)

　　IL-2R标准品(通常含6管梯度浓度)

　　生物素标记抗体、HRP标记链霉亲和素

　　显色液(TMB A/B液)和终止液

　　20×浓缩洗涤缓冲液

　　样本稀释液和封板膜‌

　　三、样本处理要求

　　血清/血浆‌：采集后需离心(2000-3000g，15-20分钟)，-20℃保存避免反复冻融‌。

　　细胞培养上清‌：离心去除沉淀后分装保存‌。

　　组织匀浆‌：需用PBS冲洗后匀浆，离心取上清‌。

　　四、操作步骤

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释(如400ng/L至25ng/L)‌。

　　加样‌：每孔加入50μL标准品或样本(建议设复孔)‌。

　　孵育‌：37℃孵育60-120分钟，洗涤3-5次‌。

　　显色‌：加入TMB避光显色15分钟，终止后450nm测OD值‌。

　　五、注意事项

　　试剂使用前需平衡至室温，避免底物接触强光‌。

　　洗涤需(建议浸泡1-2分钟/次)，避免交叉污染‌。

　　不同批次试剂不可混用，标准品稀释后需丢弃‌。

　　显色时间需严格控制，终止后15分钟内完成检测‌。

　　六、数据计算

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过回归方程计算样本浓度‌。

　　七、常见问题

　　高背景‌：可能因洗涤不充分或封闭不足导致‌。

　　无信号‌：检查酶活性或抗体效价‌。

　　重复性差‌：需确保操作一致性和试剂新鲜度‌。

　　注：以上资料仅供参考，完整操作请以实说明为准，不同品牌可能存在细节差异‌。

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