以下是关于大鼠白介素5(IL-5)ELISA试剂盒的实验使用说明，综合了多个来源的可靠信息：

　　BS-2970 大鼠白介素5(IL-5)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法检测样本中IL-5含量。预包被抗大鼠IL-5抗体的微孔板捕获样本中的IL-5，再依次加入生物素化检测抗体和HRP标记的链霉亲和素，形成复合物后通过TMB显色反应定量。颜色深浅与IL-5浓度成正比，通过标准曲线计算含量‌。

　　二、试剂盒组成

　　核心组分‌：预包被酶标板、标准品(冻干粉，需复溶)、生物素化抗体、HRP酶结合物、TMB显色液、终止液‌

　　辅助溶液‌：20×浓缩洗涤液(需1:20稀释)、样品稀释液、标准品稀释液‌

　　耗材‌：封板膜、密封袋‌

　　三、样本处理要求

　　血清/血浆‌：采集后室温静置10-20分钟，2000-3000g离心20分钟，避免溶血或脂血干扰‌。

　　细胞培养上清‌：直接离心去除颗粒物，-20℃保存时避免反复冻融‌。

　　组织匀浆‌：PBS冲洗后称重匀浆，离心取上清，建议添加蛋白酶抑制剂‌。

　　四、标准操作步骤

　　标准品稀释‌：复溶后梯度稀释(如2000-31.2 pg/mL)，建议设置8个浓度点‌。

　　加样与孵育‌：

　　每孔加100μL样本或标准品，37℃孵育90分钟

　　洗涤5次后加入生物素化抗体(100μL/孔)，37℃孵育60分钟‌

　　显色与检测‌：

　　加入TMB底物避光显色15分钟，终止反应后30分钟内测定450nm吸光度‌。

　　五、关键注意事项

　　质量控制‌：每板需设空白孔和标准曲线，OD值需扣除空白背景‌。

　　干扰避免‌：避免使用NaN3防腐剂(抑制HRP活性)，溶血/高脂样本需预处理‌。

　　保存条件‌：未使用的板条需密封干燥保存于2-8℃，标准品复溶后需当日使用‌。

　　六、性能参数

　　检测范围‌：典型为15.6-1000 pg/mL，灵敏度可达3.9 pg/mL‌。

　　精密度‌：板内/板间变异系数分别<10%

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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