大鼠苗条素受体(LROb-R)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-2971 大鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒

　　一、试剂盒简介

　　大鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒是一种基于双抗体夹心法原理设计的酶联免疫吸附检测试剂盒，用于定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清液及相关液体样本中苗条素受体的含量‌。该试剂盒通过特异性抗体捕获目标抗原，再与酶标记抗体结合形成复合物，最终通过显色反应进行定量分析‌。

　　二、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法：

　　将纯化的大鼠苗条素受体抗体包被于微孔板，形成固相抗体

　　加入样本或标准品，其中的LR/Ob-R与固相抗体结合

　　加入HRP标记的LR/Ob-R抗体，形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物

　　洗涤后加入TMB底物显色，在HRP酶催化下产生蓝色产物，酸作用下转为黄色

　　颜色的深浅与样品中LR/Ob-R浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值‌

　　三、试剂盒组成

　　试剂盒通常包含以下组分(48T/96T两种规格)：

　　微孔酶标板‌：8孔×6条(48T)或8孔×12条(96T)，预包被抗体‌

　　标准品‌：浓度通常为2700ng/L或72ng/L(不同批次可能有差异)，0.3mL-0.5mL×6管‌

　　检测抗体-HRP‌：5mL(48T)/10mL(96T)‌

　　样本稀释液‌：3mL(48T)/6mL(96T)‌

　　20×洗涤缓冲液‌：15mL(48T)/25mL(96T)，使用前需稀释‌

　　显色剂‌：A液和B液各3mL(48T)/6mL(96T)‌

　　终止液‌：3mL(48T)/6mL(96T)‌

　　封板膜‌：2张‌

　　说明书‌：1份‌

　　四、样本采集与处理

　　1. 样本类型

　　适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、尿液、胸腹水、脑脊液等‌

　　2. 样本处理方法

　　血清‌：全血室温放置2小时或4℃过夜后，1000g离心20分钟取上清‌

　　血浆‌：EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃ 1000g离心20分钟‌

　　细胞培养上清‌：1000g离心20分钟取上清‌

　　组织匀浆‌：用PBS(pH7.2-7.4)制备10%匀浆，10000g离心5分钟取上清‌

　　3. 样本保存

　　短期(48小时内)可2-8℃保存

　　长期应分装后-20℃保存，避免反复冻融‌

　　溶血样本不宜检测‌

　　五、实验步骤

　　试剂准备‌：

　　从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟‌

　　配制洗涤液：将20mL浓洗涤液加蒸馏水稀释至600mL(30倍)‌

　　标准品稀释：按说明书梯度稀释(通常设5-7个浓度点)‌

　　加样‌：

　　设空白孔(仅加样本稀释液)、标准品孔和样本孔

　　分别加入100μL标准品或处理好的样本‌

　　孵育‌：

　　37℃孵育90分钟‌

　　弃去液体，拍干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次‌

　　加酶标试剂‌：

　　每孔加入100μL HRP标记抗体(空白孔加稀释液)

　　37℃孵育60分钟‌

　　同上洗涤5次‌

　　显色‌：

　　每孔加入50μL显色剂A，再加50μL显色剂B

　　37℃避光显色15-30分钟‌

　　终止与测定‌：

　　每孔加入50μL终止液

　　15分钟内用酶标仪在450nm波长测定OD值‌

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线‌

　　根据样本OD值，从标准曲线查出相应浓度‌

　　若样本稀释过，需乘以稀释倍数‌

　　也可用回归方程计算：将OD值代入方程Y=aX+b，求出X值‌

　　七、注意事项

　　试剂保存‌：

　　未开封试剂盒2-8℃保存，有效期内使用‌

　　开封后未用完板条应立即密封，加干燥剂保存‌

　　操作规范‌：

　　不同批次试剂不可混用‌

　　使用一次性吸头避免交叉污染‌

　　避免显色剂接触金属器械‌

　　洗涤要充分，拍干时避免吸水纸直接接触孔内‌

　　质量控制‌：

　　建议标准品和样本做双复孔‌

　　显色过浅可适当延长温育时间‌

　　若OD值超出标准曲线范围，应调整样本稀释比例重新测定‌

　　仪器要求‌：

　　使用精确的移液器(0.5-10μL, 20-200μL, 200-1000μL)‌

　　酶标仪需提前预热并校准‌

　　八、技术参数

　　检测范围‌：通常为15-1000ng/L(不同品牌可能有差异)‌

　　灵敏度‌：通常5[6

　　精密度‌：

　　板内变异系数<10%

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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