大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-2889大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒

　　一、试剂盒组成与保存条件

　　大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒通常包含以下主要组分：

　　预包被微孔板(8×12 strips或8×6)

　　TGF-β2标准品(冻干粉，通常浓度为10,000pg/mL)

　　生物素标记的检测抗体(120μL/70μL)

　　HRP标记链霉亲和素(120μL/70μL)

　　TMB显色液(10mL/6mL)

　　终止液(2M H₂SO₄，10mL/6mL)

　　洗涤缓冲液(20×浓缩液)

　　样本稀释液

　　标准品稀释液

　　保存条件：未拆封试剂盒应4℃保存;拆封后，标准品需-20℃保存，其他组分4℃保存‌

　　二、实验前准备

　　1. 样本处理

　　血清‌：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟，仔细收集上清，如出现沉淀应再次离心‌

　　血浆‌：选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后离心(2000-3000转/分，20分钟)，收集上清‌

　　细胞培养上清‌：离心去除颗粒后分装保存于-80℃，避免反复冻融‌

　　组织匀浆‌：按重量体积比1:9加入PBS匀浆，离心后取上清‌

　　2. 试剂平衡

　　所有试剂及样本需室温(18-25℃)平衡30分钟，避免37℃直接溶解‌

　　3. 标准品配制

　　复溶标准品后，用稀释液梯度稀释至5,000pg/mL→78pg/mL(7个浓度点)，0pg/mL为空白对照‌

　　三、实验步骤(双抗体夹心法)

　　加样‌：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟‌

　　洗涤‌：弃液后用PBST洗涤液洗板5次，每次拍干‌

　　加检测抗体‌：每孔加100μL生物素化抗体(1:100稀释)，37℃孵育60分钟‌

　　加酶结合物‌：加入HRP标记链霉亲和素(1:100稀释)，37℃避光孵育30分钟‌

　　显色‌：加TMB显色液100μL/孔，避光反应15-20分钟(显蓝色)‌

　　终止与读数‌：加50μL终止液(变黄色)，10分钟内在450nm波长测OD值(参考波长570-630nm)‌

　　四、数据分析

　　标准曲线绘制‌：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线(R²>0.99)‌

　　样本浓度计算‌：根据样本OD值从曲线反推浓度，超出范围需稀释后重测‌

　　质量控制‌：批内CV应<10%，批间CV<12%‌

　　五、注意事项

　　安全防护‌：

　　避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触尽快用水冲洗‌

　　实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品‌

　　禁止用嘴吸取试剂盒任何成分‌

　　操作要点‌：

　　试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温‌

　　实验中不用的板条应立即放回包装袋密封保存‌

　　避免细菌污染、反复冻融或剧烈震荡‌

　　一次加样时间控制在10分钟内，样本多时推荐使用多道移液器‌

　　干扰因素‌：

　　不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制HRP活性‌

　　避免溶血或脂血样本影响检测结果‌

　　结果判读‌：

　　反应孔内颜色越深，阳性程度越强‌

　　阴性反应为无色或极浅，可用"+"、"-"号表示‌

　　也可测OD值：若大于阴性对照OD值的2.1倍即为阳性‌

　　六、技术参数

　　灵敏度‌：通常

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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