小鼠抑丝蛋白2(PFN2)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-9418小鼠抑丝蛋白2(PFN2)ELISA试剂盒

　　一、试剂盒基本信息

　　小鼠抑丝蛋白2(PFN2)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法原理设计，用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆等样本中的PFN2蛋白浓度。本试剂盒具有高灵敏度(通常≤0.137ng/mL)和良好的特异性，与相似物质无明显交叉反应‌。检测线性范围一般为0.312-20ng/mL，精密度批内差CV<10%，批间差CV<12%‌。

　　二、试剂盒组成

　　试剂盒主要包含以下组分(以96T规格为例)：

　　预包被酶标板：8×12条(包被PFN2捕获抗体)

　　标准品：1支(需按说明书稀释)

　　标准品/样品稀释液：15ml

　　生物素化检测抗体(100×)：1支

　　生物素化检测抗体稀释液：12ml

　　SABC复合物：12ml

　　TMB显色液(A/B)：各6ml

　　终止液：12ml

　　20×浓缩洗涤液：60ml

　　封板胶纸：4张‌

　　三、样本收集与处理

　　1. 样本类型

　　适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其他生物体液‌。

　　2. 样本采集

　　血清‌：使用不含热原和内毒素的试管收集血液，3000转离心10分钟分离血清

　　血浆‌：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清

　　组织匀浆‌：加入适量生理盐水捣碎后，3000转离心10分钟取上清

　　细胞上清液‌：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物‌

　　3. 样本保存

　　短期(48小时内)可保存于2-8℃;长期保存需分装后冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融‌。

　　四、实验操作步骤

　　1. 试剂准备

　　标准品稀释‌：按照说明书进行梯度稀释(通常为1:2系列稀释)

　　洗涤液配制‌：将20×浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20稀释‌

　　2. 加样

　　设空白孔(不加样品及酶标试剂)、标准孔和待测样品孔

　　标准孔加入50μl标准品

　　待测样品孔先加40μl样品稀释液，再加10μl待测样品(终稀释度5倍)

　　加样时避免触及孔壁，轻轻混匀‌

　　3. 孵育

　　封板后37℃温育30分钟‌

　　温育时建议将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，避免液体蒸发‌

　　4. 洗涤

　　手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩尽，重复5次

　　最后一次洗涤后在吸水纸上拍干，避免残留‌

　　5. 加检测抗体

　　每孔加入50μl生物素化检测抗体工作液(空白孔除外)

　　37℃温育30分钟‌

　　6. 加酶结合物

　　每孔加入50μl酶结合物工作液

　　37℃避光温育30分钟‌

　　7. 显色

　　每孔依次加入50μl显色剂A和50μl显色剂B

　　37℃避光显色10分钟(需定时观察颜色变化)‌

　　8. 终止反应

　　每孔加入50μl终止液(颜色由蓝变黄)

　　15分钟内完成OD值测定‌

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线

　　根据样品OD值，从标准曲线计算出相应浓度

　　若样品经过稀释，需乘以稀释倍数得到实际浓度‌

　　六、注意事项

　　试剂保存‌：未开封试剂盒2-8℃保存;使用前室温平衡20分钟;浓缩洗涤液结晶属正常现象，水浴加热溶解后使用‌

　　操作规范‌：

　　使用一次性吸头避免交叉污染

　　不同批次试剂勿混用

　　严格按说明书控制温育时间和温度‌

　　安全防护‌：

　　操作时佩戴手套和口罩

　　避免直接接触终止液和显色液

　　勿用嘴吸取任何试剂‌

　　质量控制‌：

　　每次实验应包含标准曲线和质控样本

　　回收率应在80-120%之间(血清样本回收率通常为87-94%)‌

　　结果解释‌：

　　本试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断

　　样本值超出检测范围时需适当稀释后重测

　　注：以上资料仅供参考，具体产品请咨询技术老师或是品牌供应商。

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