人Ⅲ型原胶原N端前肽(PⅢNP)ELISA试剂盒使用说明书

　　BS-1708 人Ⅲ型原胶原N端前肽(PⅢNP)ELISA试剂盒

　　一、试剂盒简介

　　人Ⅲ型原胶原N端前肽(PⅢNP)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)原理，用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中PⅢNP的含量‌。PⅢNP是III型胶原蛋白合成过程中产生的肽段，其血清水平可作为肝脏纤维化和肝硬化的指标‌。

　　二、试剂盒组成

　　试剂盒通常包含以下组分(具体以实际包装为准)：

　　酶标包被板：1×48孔或1×96孔(预包被捕获抗体)

　　标准品：通常为冻干粉或液体，浓度范围常见为62.5-4000pg/mL‌

　　样品稀释液：3ml×1瓶或6ml×1瓶

　　检测溶液A(生物素标记抗体)和检测溶液B(HRP标记物)

　　TMB底物溶液和终止液

　　浓缩洗涤液(20-30倍)

　　封板膜和说明书‌

　　三、样本处理要求

　　血清样本‌：室温血液自然凝固10-20分钟后，2000-3000转/分离心20分钟，收集上清。避免溶血和反复冻融‌。

　　血浆样本‌：使用EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃离心(1000×g，15分钟)‌。

　　组织匀浆‌：按1:9重量体积比加入PBS匀浆，5000×g离心5-10分钟取上清‌。

　　细胞培养上清‌：直接1000×g离心20分钟收集‌。

　　注意：NaN3会抑制HRP活性，含NaN3的样品不能检测‌。

　　四、实验操作步骤

　　试剂准备‌：

　　使用前将所有试剂平衡至室温(18-25℃)

　　按需稀释浓缩洗涤液(如20ml浓缩液加580ml蒸馏水)‌

　　标准品梯度稀释(常见7-8个浓度点)‌

　　加样与孵育‌：

　　分别设空白孔、标准孔和样品孔

　　加入标准品或样品100μL/孔，37℃孵育30-90分钟‌

　　洗板5次(每次静置30秒)，拍干

　　检测抗体孵育‌：

　　加入生物素标记抗体100μL/孔，37℃孵育60分钟‌

　　再次洗板5次

　　显色与终止‌：

　　加入TMB底物90μL/孔，37℃避光显色15分钟

　　加入终止液50μL/孔，立即测定‌

　　结果读取‌：

　　使用酶标仪在450nm波长读取OD值

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　通过标准曲线计算样品浓度‌

　　五、注意事项

　　操作规范‌：

　　不同批次试剂不可混用

　　避免底物接触金属器具

　　严格控温和时间，建议做双复孔‌

　　保存条件‌：

　　未开封试剂盒：部分组分-20℃保存，部分2-8℃保存(详见标签)‌

　　开封后：酶标板加干燥剂密封保存于-20℃，剩余试剂按标签温度保存‌

　　质量控制‌：

　　板内变异系数应<10%，板间变异系数<10%‌

　　回收率应在85%-115%范围内‌

　　安全事项‌：

　　TMB底物有毒性，终止液有腐蚀性，需防护‌

　　避免直接接触试剂，操作时穿戴防护装备‌

　　六、技术参数

　　检测范围‌：常见62.5-4000pg/mL(不同品牌有差异)‌

　　灵敏度‌：检测限通常≤25pg/mL‌

　　精密度‌：批内CV≤10%，批间CV≤15%‌

　　有效期‌：一般为6-12个月(以包装标签为准)‌

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