人白细胞介素21(IL-21)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-1648人白细胞介素21(IL-21)ELISA试剂盒

　　以下是关于人白细胞介素21(IL-21)ELISA试剂盒的实验使用说明：

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法检测样本中IL-21浓度‌。预包被的捕获抗体与样本中IL-21结合后，再与HRP标记的检测抗体形成复合物，通过TMB显色反应(蓝色→黄色)测定450nm吸光度，颜色深浅与IL-21浓度正相关‌。

　　二、试剂盒组成

　　预包被板‌：96孔或48孔(2-8℃保存)‌

　　标准品‌：浓度通常为0-320pg/mL或360ng/L(需稀释)‌

　　检测抗体‌：生物素化抗体工作液‌

　　显色系统‌：TMB底物A/B液、终止液‌

　　洗涤液‌：20-30倍浓缩液(使用前需稀释)‌

　　三、样本处理

　　血清/血浆‌：

　　血清：室温凝固10-20分钟后，2000-3000×g离心20分钟‌

　　血浆：EDTA/肝素抗凝，3000×g离心15-30分钟‌

　　避免反复冻融，-20℃分装保存‌

　　细胞上清/组织匀浆‌：

　　细胞上清：3000×g离心10分钟‌

　　组织匀浆：PBS匀浆后5000×g离心5-10分钟‌

　　四、操作步骤

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释(如0-320pg/mL)‌

　　加样孵育‌：

　　每孔加100μL样本或标准品，37℃孵育90分钟‌

　　洗涤‌：手工洗板5次(每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩干)‌

　　抗体孵育‌：

　　加入生物素化抗体工作液100μL，37℃孵育60分钟‌

　　酶结合物‌：

　　加入HRP标记抗体100μL，37℃孵育30分钟‌

　　显色‌：

　　加TMB底物100μL，避光显色15分钟‌

　　终止与检测‌：

　　加终止液100μL，3分钟内测定OD450值‌

　　五、注意事项

　　试剂保存‌：

　　未开封试剂盒2-8℃保存，开封后板条需密封防潮‌

　　显色剂B需避光，终止液含强酸需谨慎操作‌

　　质量控制‌：

　　每次实验需包含空白孔(仅加稀释液)‌

　　板内/板间变异系数应

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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